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Artigo Analysis of an alternative food, soy paçoca, preparation: chemical composition, anti-nutricional constituents and nutricional evaluation(Journal of Food Technology, 2003) Morais, Ana Heloneida de Araújo; Cruz, Ana; Pereira, Railene; Leite, Edda; Lima, Dilma; Sales, Maurício Pereira deThe chemical composition of an alternative Brazilian food preparation showed that this product had a carbohydrate content of 45.90% and a protein content of 38.92%. Anti-nutritional factors were assayed in soya "pacoca" protein fractions. Human salivary alpha -amylase was inhibited with salivary amylase inhibitor ( alpha -IA) level of 437.5 micro g of inhibitor to 1.0 mg of protein fractions. Trypsin was inhibited with trypsin inhibitor activities level (TIA) of 57 micro g of inhibitor to 1.0 g of protein fractions. Nutritional evaluation of the soya "pacoca" showed a digestibility of 66.9% compared to 90.0% for casein. The PER of soya "pacoca" was 1.65 and was 4.01 for casein. The NPR of the food preparation was 2.85 and the test diet was 3.02. Indices calculated for the soya "pacoca" food preparation indicated that it was less efficient in supporting growth and maintenance of the weanling ratsDissertação Atividade bioinseticida e mecanismo de ação de vicilinas de sementes Erythrina velutina sobre moscas-das frutas Ceratitis capitata(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-09-21) Macedo, Leonardo Lima Pepino de; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/7934184974850346; Malavasi Filho, Aldo; ; http://lattes.cnpq.br/3571531847833437; Ximenes, Maria de Fátima Freire de Melo; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786307T7&dataRevisao=nullA mosca-da-fruta Ceratitis capitata é considerada a praga mais destrutiva da fruticultura mundial, para o seu controle vários programas de erradicação baseados em agroquímicos foram criados para permitir o comércio mundial de frutas. Soluções para a diminuição do uso de inseticidas sintéticos na agricultura estão baseadas no desenvolvimento de novos compostos alvos-específicos com menos persistência no meio ambiente, em especial proteínas vegetais com efeitos inseticidas. Neste trabalho o principal objetivo foi avaliar o efeito deletério de uma vicilina purificada de sementes de E. velutina (EvV) para larvas de C. capitata e propor o mecanismo de ação da proteína. EvV foi purificada, caracterizada e o seu efeito deletério foi testado em sistemas de bioensaios. O mecanismo de ação de EvV foi determinado por técnicas de imunodetecção e localização por fluorescência em estruturas quitinosas, presentes no sistema digestório de C. capitata. EvV é uma glicoproteína com afinidade a quitina cuja massa molecular foi de 216,57 kDa, determinado por cromatografia de gel filtração em sistema de FPLC. Por SDS-PAGE, EvV dissociouse em duas subunidades principais de 54,8 e 50,8 kDa, e quando foi submetida a eletroforese em condições nativas apresentou uma banda única de característica eletroforética ácida. Nos bioensaios a WD50 e a LD50 para as larvas foram de 0,13% e 0,14% (p/p). Os efeitos deletérios de EvV foram relacionados a sua ligação a estruturas quitinosas presentes na membrana peritrófica e no epitélio intestinal, associado com a baixa capacidade de C. capitata em digeri-la. Com esses resultados é possível propor a EvV como candidata a fazer parte de programas de manejo integrado de pragas, na composição de iscas tóxicas, como um potencial bioinseticida de natureza protéica.Dissertação Avaliação da ação bioinseticida de SBTI e vicilina de Erythrina velutina em enzimas digestivas e membrana peritrófica de larvas de Plodia interpunctella (Lepidoptera: Pyralidae)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2007-09-28) Amorim, Ticiana Maria Lúcio de; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/6216030147805627; Franco, Octávio Luiz; ; http://lattes.cnpq.br/8598274096498065; Uchoa, Adriana Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6644671747055211Plodia interpunctella (traça-indiana-da-farinha) é uma praga cosmopolita que ataca não somente uma ampla gama de produtos armazenados, mas também outros produtos alimentícios. Devido a sua importância econômica várias pesquisas têm sido realizadas com o intuito de identificar um método capaz de controlar esta praga sem danos ao ambiente. O estudo de inibidores de enzimas digestivas, lectinas e proteínas que se ligam à quitina tem sido proposto como uma alternativa para controlar o dano causado por estes insetos. Neste estudo alvos específicos para inibidores de enzimas e proteínas ligantes à quitina foram identificados nas larvas desta praga. Para isso, durante o desenvolvimento de larvas de P. interpunctella as classes de enzimas digestivas alvos foram identificadas por ensaios de atividade in vitro e SDS-PAGE, pH e temperatura ótimos avaliados para a indicação de possíveis proteínas inibidoras para a principal classe de proteinase detectadas no intestino das larvas. Outro alvo para proteínas deletérias foi indicado pela identificação da membrana peritrófica por ensaios químicos de detecção de quitina e por microscopia de luz. Durante o período de desenvolvimento as larvas de P. interpunctella, alimentadas com uma dieta baseada em bagaço de cana, passaram por 5 ínstares e pelo estágio pré-pupal. A maior atividade proteolítica (UA/intestino) foi detectada no estágio pré-pupal, enquanto que a maior atividade proteolítica específica (UA/mg proteína) foi observada no terceiro ínstar, utilizando azocaseína como substrato a pH 9,5 e a 50°C. A inibição das proteinases presentes no homogenato intestinal de larvas de terceiro ínstar foi mais evidente quando inibidores de proteinases serínicas (SBTI, TLCK e PMSF, com 96%, 89% e 20% de inibição, respectivamente) foram utilizados nos ensaios. No estágio pré-pupal, a maior inibição observada foi com SBTI (96%), TLCK (81 %) e TPCK (20%), indicando a predominância de atividade enzimática de proteinases serínicas a pH 9,5 no intestino de Plodia interpunctella. Por zimograma foi observada inibição de bandas de menor massa molecular por TLCK e um atraso na corrida eletroforética dessas bandas causado por SBTI. Quando avaliado o efeito in vivo de SBTI no desenvolvimento larval, não foi observada mortalidade e nem efeito na massa das larvas sobreviventes. Estabelecido o segundo alvo de atuação, baseado na ligação à quitina, bioensaios usando a vicilina EvV foram realizados, onde um LD50 de 0,23% e um WD50 de 0,27% foram estabelecidos para esta proteína deletéria. O mecanismo de ação foi verificado por ensaios de digestibilidade de EvV durante a passagem pelo trato intestinal larval, sendo observado o envolvimento de um fragmento reativo, observado por imunodetecção, no efeito deletério da vicilina. A ligação de EvV à membrana peritrófica foi comprovada através de ensaios de imunohistoquímica. Estes resultados apontam para uma vicilina ligante à quitina que pode vir a ser utilizada como bioinseticida para Plodia interpunctellaDissertação Avaliação do efeito citotóxico da lectina da esponja marinha Cliona varians contra células de leucemia mielóide crônica(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2007-12-14) Moura, Gioconda Emanuella Diniz de Dantas; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/3438053824269092; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=nullNeste trabalho, a linhagem K562 de células de leucemia mielóide crônica, expressando a proteína oncogênica BCR-ABL, foi usada como modelo para investigar a atividade antitumoral da lectina CvL purificada da esponja marinha Cliona varians. CvL inibiu o crescimento de células K562 com um IC50 de 70 g/mL, mas não afetou a viabilidade celular de linfócitos normais de sangue periférico humano no mesmo intervalo de concentrações testadas (1 80 g/mL). A morte celular ocorreu após 72 horas de exposição à lectina e com alterações nucleares típicas de apoptose como analisado pela fluorescência de DAPI. Investigação dos possíveis efetores deste processo mostrou que a morte celular ocorreu sem ativação de caspases e na presença de expressões aumentadas de Bcl-2 e Bax. O fato de CvL desencadear a liberação de catepsina B, como evidenciado pela microscopia de fluorescência, e do inibidor E-64 bloquear completamente a morte celular induzida por CvL, sugerem papel central dessa protease lisossomal na ativação de uma via alternativa de morte celular. CvL também induziu o aumento de expressão do receptor de morte TNFR-1 e a diminuição dos níveis de NFκB. Estes efeitos foram acompanhados pelo aumento significativo na expressão de p21 e pela modulação negativa de pRb, mostrando que CvL foi capaz de bloquear a progressão do ciclo celular. Juntos, estes dados sugerem que catepsina B age como mediador da citotoxicidade induzida por CvL possivelmente através de uma conexão ainda não caracterizada com a via dos receptores de morteArtigo Comparative digestibility and the inhibition of mammalian digestive enzymes from mature and immature cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp.) seeds(Food Control, 2004) Morais, Ana Heloneida de Araújo; Lima, Liziane Maria de; Oliveira, Antônia Elenir Amâncio; Pereira, Railene; Miranda, Maria Raquel Alcântara de; Sales, Maurício Pereira deGlobulins and albumins from mature cowpea seeds had inhibitory activity levels of 9.5 and 67.1 units trypsin inhibited per mg protein and globulins and albumins from immature seeds had trypsin inhibitory activity levels of 6.3 and 26.6 units trypsin inhibited per mg protein, respectively. Albumins from immature seeds had inhibitory activity level of 4 units salivary amylase inhibited per mg albumin. The globulins (native and heated) from both seeds were submitted to hydrolysis by trypsin and analyzed by SDS-PAGE. Native globulins from mature and immature seeds showed digestion products of ∼30 and ∼20 kDa, respectively. Trypsin strongly digested heated globulins from both kinds cowpeasDissertação Construção de modelos de interação in silico e in vitro do inibidor do tipo Kunitz de Adenanthera pavonina L. para as enzimas cisteínicas e serínicas(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-07-02) Migliolo, Ludovico; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/0805599101682606; Lima, João Paulo Matos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/3289758851760692; Franco, Octávio Luiz; ; http://lattes.cnpq.br/8598274096498065Os inibidores de proteinases serínicas (IPs) estão extensamente distribuídos na natureza e inibem a atividade enzimática in vitro e in vivo. Estes IPs em sementes de leguminosas compreendem sete famílias, no entanto as famílias Bowman-Birk e do tipo Kunitz são as mais estudadas e representam um papel importante na primeira linha de defesa contra insetos pragas. Alguns inibidores do tipo Kunitz possuem atividades para proteinases serínicas e cisteínicas sendo denominados inibidores bifuncionais, como o inibidor ApTKI da semente de Adenanthera pavonina. O inibidor de A. pavonina por apresentar essa característica incomum aos inibidores dessa família foi utilizado para o estudo da interação entre as proteinases serínica (tripsina) e cisteínica (papaína). Para determinar a interação in vitro de ApTKI e as enzimas alvo foi realizada a purificação do inibidor a partir de técnicas cromatográficas e ensaios de inibição. O modelo 3D do inibidor bifuncional ApTKI foi construído pelo programa SWISS-MODEL através da metodologia de modelagem por homologia utilizando como molde o inibidor de tripsina de soja (STI, pdb:1ba7) que apresentou 40% de identidade com a proteína alvo. A qualidade do modelo foi avaliada pelo programa PROCHECK. Para a análise do complexo in silico entre as enzimas alvo e o inibidor foi utilizado o programa HEX 4.5. Estes resultados confirmaram os ensaios inibitórios in vitro, onde ApTKI apresentou a capacidade de inibir simultaneamente tripsina e papaína. Algumas das diferenças observadas nos resíduos do sitio reativo explicam a forte afinidade para tripsina e a fraca para papaínaDissertação Determinação de motivos de ligação à quitina em vicilinas de Canavalia ensiformis e Vigna unguiculata através de métodos in silico e relação com suas toxicidades para o bruquídeo Callosobruchus maculatus (Coleoptera:Bruchidae)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2009-02-06) Aquino, Rodrigo Oliveira de; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/4722621413633925; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null; Franco, Octávio Luiz; ; http://lattes.cnpq.br/8598274096498065A quitina (homopolímero linear contendo resíduos de β-1,4-N-acetil-D-glicosamina (GlcNac) é um importante componente estrutural da parede celular de fungos e exoesqueletos de muitos invertebrados pragas, tais como insetos e nematóides. Em sistemas digestórios de insetos forma uma matriz denominada de membrana peritrófica. Um dos mais estudados modelos de interação proteína-carboidrato é o modelo que envolve as proteínas ligantes à quitina. Dentre os motivos já caracterizados envolvidos nesta interação se destacam o motivo heveína (HD), obtida de Hevea brasiliensis (Seringueira), o motivo R&R consenso (R&R), encontrado em proteínas cuticulares de insetos, e o motivo denominado neste estudo como motivo conglicinina (CD), encontrado na estrutura cristalográfica da β-conglicinina complexada com GlcNac. Estes três motivos de ligação à quitina foram usados para determinar qual(is) deles poderia(m) estar envolvido(s) in silico na interação das vicilinas de Canavalia ensiformis e Vigna unguiculata com quitina, como também associar estes resultados com o WD50 destas vicilinas para larvas de Callosobruchus maculatus. A técnica de modelagem comparativa foi utilizada para construção do modelo 3D da vicilina de V. unguiculata, que não foi encontrada nos bancos de dados. Através do programa ClustalW obteve-se a localização destes domínios na estrutura primária das vicilinas. Os domínios R&R e CD foram encontrados com maior homologia nas seqüências primárias das vicilinas e foram alvos de estudos de interação. Através do programa GRAMM foram obtidos modelos de interação ( dockings ) das vicilinas com GlcNac. Os resultados mostraram que, através de análises in silico, o motivo HD não faz parte da estrutura das vicilinas, comprovando o resultado obtido com o alinhamento das seqüências primárias; o motivo R&R, apesar de não ter semelhança estrutural nas vicilinas, provavelmente tem uma participação na atividade de interação destas com GlcNac; enquanto que o motivo CD participa diretamente na interação das vicilinas com GlcNac. Estes resultados in silico mostram que o número de aminoácidos, os tipos e a quantidade de ligações feitas pelo motivo CD com GlcNac parecem estar diretamente associados ao poder deletério que essas vicilinas possuem para larvas de C. maculatus. Isso pode constutuir um passo inicial na elucidação de como as vicilinas interagem com quitina in vivo e exercem seu poder tóxico para insetos que possuem membrana peritróficaDissertação Efeito do consumo de farinha de linhaça (Linum usitatissimum) no crescimento de ratos Wistar e relação com a digestibilidade de globulinas e fatores antinutricionais protéicos(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2007-06-28) Lopes, Katya Anaya Jacinto; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/7632524600986257; Vasconcelos, Ilka Maria; ; http://lattes.cnpq.br/0103197383336584; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=nullA linhaça (Linum usitatissimun) é uma importante oleaginosa consumida crua como suplemento nutricional, que apesar de representar rica fonte de nutrientes, pode ter valor nutricional reduzido devido à presença de fatores antinutricionais. Neste estudo as principais frações protéicas da farinha de linhaça crua foram extraídas e isoladas, sendo obtidos 12% de albuminas, 82% de globulinas, 5% de glutelinas e 1% de prolaminas; o padrão eletroforético das proteínas mostrou que as albuminas apresentaram bandas majoritárias de baixa massa molecular em torno de 21 kDa e menores, indicativas da presença de inibidores de tripsina, e nas globulinas foram observadas algumas bandas intensas que provavelmente compõem uma proteína multimérica de alta massa molecular do tipo legumina. Após a obtenção da composição centesimal da farinha crua, esta foi usada como fonte exclusiva de proteínas para ratos recém-desmamados, a fim de avaliar seu efeito no crescimento dos mesmos. Os resultados de depressão do crescimento (ganho de peso 73% inferior ao grupo padrão) e redução no crescimento dos vilos intestinais (35%) levaram à verificação da digestibilidade in vitro e in vivo da fração globulina e detecção de fatores antinutricionais protéicos (inibidores de enzimas digestórias de mamíferos e lectinas) na fração albumina, como possíveis fatores deletérios ao crescimento dos ratos em estudo. As globulinas nativas apresentaram baixa susceptibilidade a digestão in vitro por tripsina e quimotripsina, no entanto sofreram maior degradação pela pancreatina. O aquecimento das globulinas por 5 e 15 minutos a 100ºC aumentou consideravelmente a digestibilidade pela tripsina e pancreatina. No experimento de digestibilidade in vivo, a globulina apresentou alta susceptibilidade à degradação pelas enzimas digestivas (93,2%), semelhante à proteína padrão. Na avaliação da fração albumina, esta apresentou alta atividade inibitória de tripsina (100%) e, em menor grau, inibição de quimotripsina (28,3%), não sendo detectada atividade hemaglutinante. Os resultados obtidos são indicativos da ação negativa dos inibidores de tripsina no crescimento dos animais, no entanto não se pode descartar a possibilidade de uma ação sinergística com outros fatores antinutricionais, que comprometem a utilização da linhaça crua como um alimento alternativoDissertação Efeito inseticida de vicilinas isoladas de sementes de erythrina velutina em condições de semi-campo para moscas das frutas (ceratitis capitata)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2010-02-26) Macedo, Cleysyvan de Sousa; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/7439015867181523; Uchoa, Adriana Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6644671747055211; Andrade, Lúcia Betânia da Silva; ; http://lattes.cnpq.br/7601616073997660Vicilinas ligantes a quitina de sementes de Erythrina velutina, Canavalia ensiformis e Phaseoulus vulgaris foram isoladas através de procedimento que consistiu de precipitação com sulfato de amônio seguida de cromatografia de afinidade em coluna de quitina. O efeito dessas vicilinas sobre fêmeas adultas de Ceratitis capitata foi examinada por bioensaios em condições de laboratório e por bioensaios em condições de semi-campo. O mecanismo de ação dessas vicilinas foi determinado por um ensaio de digestibilidade in vivo e pela propriedade de ligação a uma matriz de quitina. Entre as vicilinas testadas, a vicilina de E. velutina foi a única letal, causando mortalidade de 100% quando adicionada à dieta das moscas das frutas adultas na concentração de 10% (p/p). Este efeito inseticida da vicilina de E. velutina foi também testado em condições de semi-campo, onde concentrações de 10 % e 15% (p/p) de vicilina adicionada à dieta foram letais para fêmeas adultas de C. capitata. Esse efeito deletério das proteínas ligantes à quitina não foi associado somente à propriedade de ligação à quitina, visto que as outras vicilinas, além da lectina de gérmen de trigo (WGA) foram tóxicas quando adicionadas à dieta das moscas das frutas. Entretanto, a resistência/susceptibilidade dessas proteínas aos processos digestórios desses insetos poderia explicar os diferentes efeitos observados. Das proteínas ligantes à quitina, apenas aquelas refratárias à ação das enzimas digestivas nos processos digestórios teve ação inseticida. Esses resultados mostraram que vicilina de E. velutina é um bioinseticida com potencial de uso nos programas de controle de pragas diminuindo a população de moscas das frutas no campoTese Efeito pró-inflamatório de uma lectina purificada da esponja marinha Cliona varians(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-05-12) Queiroz, Alexandre Flávio Silva de; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/4447420857221826; Paiva, Patrícia Maria Guedes; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4787593U2&dataRevisao=null; Kiota, Sumika; ; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=nullA lectina denominada CvL, com especificidade para D-galactose e sacarose foi purificada da esponja marinha Cliona varians através de fracionamento com acetona seguido por cromatografia de afinidade em Sepharose CL 4B. No presente trabalho, foi estudada a atividade inflamatória de CvL in vivo através dos modelos de edema de pata e migração de leucócitos em peritonite induzida em camundongos. Foram analisados os efeitos de carboidratos na inibição da peritonite, o efeito da lectina na ativação de macrófagos e o efeito de antiinflamatórios no modelo de peritonite provocada pela CvL. Os resultados mostraram que o edema de pata induzido pela CvL foi dose dependente até 50 µg/pata. Essa mesma dose quando administrada na cavidade peritoneal, foi capaz de induzir migração celular (9.283 células/µL) com pico em 24 horas após a administração. Este efeito foi inibido quando a CvL foi previamente incubada com os carboidratos D-galactose e sacarose. O pré-tratamento dos camundongos com 3% de tioglicolato aumentou a população de macrófagos em 2,3 vezes o que provocou o aumento da migração de neutrófilos em 75,58% (p<0,0001) após 24 horas da injeção da CvL. No entanto, com a injeção de fMLP não foi observado nenhum efeito significativo. O pré-tratamento dos camundongos com dexametasona (corticóide antagonista de citocinas) reduziu a migração de neutrófilos em 65,6% (p<0,001), com diclofenaco ( antiinflamatório não esteróide não seletivo) reduziu em 34,5% (p<0,001) e com Celecoxibe (antiinflamatório não esteróide seletivo) não apresentou efeito. Os resultados do presente trabalho são indicativos de que a CvL possui atividade pró-inflamatória, induzindo a migração de neutrófilos, provavelmente através da indução da liberação de citocinas quimiotácticas na ativação de macrófagos residentes no peritônioTese Estudo da produção de pectinase por fermentação em estado sólido utilizando pedúnculo de caju como substrato(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2007-12-20) Santos, Sharline Florentino de Melo; Macedo, Gorete Ribeiro de; Silva, Flávio Luiz Honorato da; ; http://lattes.cnpq.br/2082780006180637; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4788057U7; ; http://lattes.cnpq.br/4846443214585734; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; Pinto, Gustavo Adolfo Saavedra; ; http://lattes.cnpq.br/8145857415447122; Santos, Everaldo Silvino dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799564Y2As enzimas pectinolíticas ou pectinases formam um grupo heterogêneo de enzimas que hidrolisam as substâncias pécticas, são usadas na extração de suco de fruta e sua clarificação, tratamento de fibra têxtil e extração de óleo vegetal. O objetivo deste trabalho foi o estudo da produção de pectinases (cinética fermentativa) através da fermentação em estado sólido, usando como substrato o pedúnculo de caju seco e como agente da fermentação o microrganismo Aspergillus niger CCT 0916. Utilizando a metodologia do planejamento experimental fatorial e análise de superfície de resposta estudou-se a influência da umidade inicial do meio, suplementação do meio com fonte de nitrogênio e fonte de fósforo. Como fonte de nitrogênio foi utilizado o sulfato de amônia e como fonte de fósforo o fosfato de potássio monobásico. Estudou-se, também, a melhor condição de extração da enzima produzida do meio de fermentação. Neste caso, foram estudadas as variáveis: razão volume de solvente/gramas de meio fermentado e tempo de contato entre as fases, utilizando-se dois sistemas de extração com e sem agitação. Como meio de cultivo foram utilizados dois resíduos do pedúnculo de caju: resíduo sem lavar e resíduo lavado. Estes resíduos diferem devido ao tratamento dado antes da secagem. O sem lavar foi obtido secando o resíduo após a extração do suco, enquanto que o lavado, foi obtido lavando-se com água, cinco vezes, após a extração do suco, na proporção 1 kg de bagaço para 2 litros de água. A caracterização físico-química dos resíduos mostrou composições diferentes, principalmente em relação aos teores de açúcares redutores e pectina. Durante o cultivo foram analisados, em intervalos de aproximadamente 12 horas, umidade do meio, pH, teor de proteína, açúcares redutores, atividade da poligalacturonase (PG) e o percentual de redução de viscosidade. Para o resíduo sem lavar o pico de atividade foi com 40% de umidade e 1% de nitrogênio, sem adição de fósforo, com 30 horas de cultivo sendo 16 U/g de atividade de PG e 82% de redução de viscosidade. As equações empíricas obtidas fornecem valores bem próximos aos experimentais nas mesmas condições de processo, 15,55 U/g de PG e 79,57% de redução de viscosidade para o resíduo sem lavar. Assim como para o resíduo sem lavar, para o resíduo lavado os picos de produção da enzima ocorreram para as mesmas condições de processo: umidade de 40%, nitrogênio de 1%, sem adição de fósforo, com 22 horas de cultivo. Nesta condição, obteve-se atividade da poligalacturonase de 9,84 U/g e percentual de redução de viscosidade de 81,36%. Estes valores estão bem próximos aos valores experimentais que foram de 10,1 U/g de PG e 81%, respectivamente. Na extração da PG o sistema que apresentou os melhores resultados de atividade foi o operado com agitação e a melhor condição de extração foi com o tempo de contato solvente com o meio de fermentação de 100 minutos e a razão volume de solvente com o meio fermentado 5 (mL/g)Dissertação Influência de fatores ambientais na incidência do vírus da infecção hipodermal e necrose hematopoiética (IHHNV) no camarão Litopenaeus vannamei cultivado em fazendas do Estado do Rio Grande do Norte (RN)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-08-29) Silva, Cimária Porfírio Rodrigues de Oliveira da; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/0287090839777461; Braz, Regina de Fátima dos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/9442000157600332; Pontes, Cibele Soares; ; http://lattes.cnpq.br/3943018673158703; Molina, Wagner Franco; ; http://lattes.cnpq.br/8437464961129518A carcinicultura é a área da aquicultura mais rentável do Rio Grande do Norte (RN), que é um dos maiores produtores do Brasil. Porém, as infecções que acometem os camarões vêm causando importantes perdas econômicas. A infecção é resultado da interação entre o camarão, o meio ambiente e o patógeno. A alteração desses fatores, pode levar a uma situação de estresse e suscetibilidade à infecções oportunistas. Uma dessas infecções, causada pelo vírus da Infecção Hipodermal e Necrose Hematopoiética (IHHNV), encontra-se largamente distribuída em vários países e apresenta uma grande variedade de hospedeiros. Para otimizar as condições de produção do camarão de cultivo Litopenaeus vannamei, a espécie mais cultivada no Brasil, é necessário compreender os efeitos dos fatores ambientais na suscetibilidade dessa espécie às infecções. O presente estudo teve por objetivo determinar a prevalência do IHHNV e investigar a influência de fatores ambientais como a salinidade, temperatura, densidade de estocagem, oxigênio dissolvido e pluviosidade na incidência do IHHNV em fazendas de cultivo do L. vannamei, no estado do RN. Para determinar a prevalência do IHHNV foram utilizados 1089 amostras de L. vannamei coletados de sete fazendas. Para a realização do estudo sobre a influência de fatores ambientais 525 amostras do camarão L. vannamei foram coletadas em oito fazendas localizadas em regiões de águas oligohalinas (0-1 ), mesohalinas (21-30 ) e hipersalinas (38-57 ), utilizando sistema de densidade de estocagem extensivo (≤15 camarões/m2), semi-intensivo (18-27 camarões/m2) e intensivo (>30 camarões/m2). A infecção pelo IHHNV foi determinada em pleópodos e hemolinfa utilizando a reação da polimerase em cadeia (PCR). Os fatores ambientais foram registrados durante a coleta dos animais nos viveiros das fazendas, utilizando um refratômetro para medir a salinidade e um medidor multi-parâmetro para medir a temperatura e o oxigênio dissolvido da água. A prevalência do IHHNV no RN foi 43% (468 camarões infectados de 1089), variando nas diferentes fazendas. Nas sete fazendas estudadas, a prevalência do IHHNV variou de 18,6% a 54,8%. As taxas de infecção nas fazendas de águas oligohalinas, mesohalinas e hipersalinas foram respectivamente 43,10% (125/290), 31,2% (15/48) e 24,6% (46/187) e foi significativamente maior em camarões cultivados em águas oligohalinas (P<0,001). As taxas de infecção nos viveiros de sistema extensivo, semi-intensivo e intensivo foram respectivamente, 28,7%, 28,28% e 47,84% e foi significativamente maior em alta densidade de estocagem (P<0,001). Neste trabalho foi encontrado uma alta prevalência do IHHNV e um efeito significativo da salinidade e da densidade de estocagem, mas não da temperatura, pluviosidade e concentração do oxigênio dissolvido sobre a taxa de infecção pelo IHHNV no camarão L. vannamei cultivado no Nordeste brasileiroDissertação Lectina da esponja marinha Tedania ignis: purificação, caracterização e interação com leishmanias(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2006-08-18) Dias, Anne Shyrley Ferreira; Santos, Elizeu Antunes dos; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null; ; http://lattes.cnpq.br/0149103138701370; Franco, Octávio Luiz; ; http://lattes.cnpq.br/8598274096498065; Leite, Edda Lisboa; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4783254U6&dataRevisao=nullUma lectina foi purificada e caracterizada da esponja marinha Tedania ignis. O procedimento de purificação foi conduzido a partir do extrato bruto obtido por solubilização em tampão Bórax 50mM, pH 7,5 e precipitação protéica com 30% de sulfato de amônio (FI). O precipitado foi dissolvido no tampão de extração e fracionado com 1,0 volume de acetona (F1,0). A lectina foi purificada desta fração por meio de cromatografia de afinidade em Sepharose 6B. A proteína apresentou uma massa molecular de 45 kDa, conforme determinada por eletroforese em poliacrilamida em SDS, e se mostrou estável até a temperatura de 40ºC, por 1 hora. Uma curva de pH foi conduzida entre os valores de pH 2,5 a 11,5, onde observou-se uma maior atividade em pH 7,5. Dentre os eritrócitos humanos testados ela aglutinou preferencialmente os do tipo B tratados com papaína. A atividade hemaglutinante da lectina foi dependente do cátion bivalente Mn+2 e foi inibida pelos carboidratos galactose, xilose e frutose. Formas promastigotas de Leishmania chagasi coradas com Coomassie blue R-250 foram aglutinadas por F1,0 e na presença de galactose essa interação não foi observada. Esses resultados indicam que essa lectina pode estar envolvida no processo de defesa e que pode vir a ser utilizada como ferramenta biológica nos estudos com esse protozoárioDissertação Novas propriedades do SKTI (Inibidor de tripsina de soja): inibição para elastase neutrofílica humana e efeitos no processo de injúria pulmonar aguda(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2010-05-07) Ribeiro, Jannison Karlly Cavalcante; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/5904065969317677; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799567J8&dataRevisao=null; Vasconcelos, Ilka Maria; ; http://lattes.cnpq.br/0103197383336584Sementes de leguminosas são conhecidas como uma rica fonte de inibidores de proteinases, destacando-se dentre estes o inibidor de tripsina da soja (SKTI) que é uma proteína amplamente estudada e caracterizada para muitas propriedades biológicas. Entretanto seus efeitos aplicados a desordens inflamatórias ainda são pouco conhecidos. SKTI foi purificado à partir de uma fração comercial de soja através de cromatografia de troca aniônica em Resource Q. A proteína purificada foi capaz de inibir a elastase de neutrófilos humanos (ENH) e a tripsina bovina. O valor da sua IC50 foi de 8 μg.mL-1 (0.3 nM) e nessa concentração o SKTI não foi capaz de provocar efeitos hemolíticos ou citotóxicos sobre as populações celulares sanguíneas humanas. Por meio do modelo de toxicidade sistêmica aguda, utilizando camundongos, também não foram observados efeitos deletérios sobre órgãos, células sanguíneas e alterações nos níveis das enzimas hepáticas aspartato amino transferase (AST) e alanina amino transferase (ALT). Neutrófilos humanos incubados com SKTI na concentração de 0.3 nM apresentaram uma diminuição da liberação de ENH quando estimulados pelos ativadores PAF e fMLP (83,1% e 70 %, respectivamente). Estes resultados mostram que o SKTI foi capaz de afetar ambas as vias PAF/fMLP de liberação de ENH, sugerindo esta proteína como um possível antagonista dos receptores PAF/fMLP. Modelos in vivo de injúria pulmonar aguda mediante estimulação por LPS de Escherichia. coli demonstraram uma supressão significativa dos eventos inflamatórios atribuídos à atividade elastásica de forma dose dependente. Cortes histológicos corados por hematoxilina e eosina confirmaram a diminuição da inflamação tecidual. Estes resultados sugerem que o SKTI pode ser indicado como um potencial agente farmacológico na terapia de muitas doenças inflamatóriasDissertação Purificação e caracterização parcial de uma B-D glicosidase de Artemia franciscana com ação sobre celobiose e lactose(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-02-27) Nascimento, Robério Medeiros do; Abreu, Luiz Roberto Diz de; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723470U6; ; http://lattes.cnpq.br/4591915204523482; Franco, Octávio Luiz; ; http://lattes.cnpq.br/8598274096498065; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911-D-glicosidase (EC 3.2.1.21) é uma das mais interessantes glicosidases, especialmente por hidrolisar celobiose liberando glicose, último passo de degradação de celulose. Esta função faz com que a -D-glicosidase seja de grande interesse como um versátil biocatalizador industrial, sendo critica para vários processos de bio-tratamento / biorrefinaria, como produção de bioetanol. Neste trabalho, uma -D-glicosidase extraída de extratos protéicos do invertebrado marinho Artemia franciscana foi purificada e caracterizada com uma combinação de precipitação com sulfato de amônio (30; 50; 80%), a fração saturada na faixa de 50% (chamada F-II) foi aplicada em uma cromatografia de exclusão molecular em Sephacryl S-200, as frações correspondentes ao primeiro pico de atividade da -D-glicosidase foram reunidas e aplicadas numa cromatografia de troca iônica em Mono Q; o terceiro pico protéico obtido nessa cromatografia, o qual coincide com o pico de atividade da -D-glicosidase, foi reunido e aplicado numa cromatografia gel filtração Superose 12 onde o primeiro pico protéico, o qual possui atividade da -D-glicosidase, foi recromatografado em Superose 12. Esta enzima provavelmente é multimerica, constituída por três subunidades, de massa molecular de 52,7 kDa (determinado por SDS-PAGE) e com massa molecular nativa de 157 kDa (determinado por cromatografia gel filtração em Superose 12 sob o sistema FPLC). A enzima foi purificada 44,09 vezes com uma recuperação de 1,01%. Utilizando-se -nitrofenil--D-glicopiranosídeo como substrato obtivemos uma Km aparente de 0,229 mM (12,7 M de produto/cm/hora) e Vmáx de 1,109 mM.60min-1.mL-1. O pH ótimo e a temperatura ótima de catálise do substrato sintético foram 5,0 e 45C, respectivamente. A atividade -D-glicosidásica foi fortemente inibida por nitrato de prata e N-etilmaleimida, esta inibição indica o envolvimento de radicais sulfidrila na hidrólise do substrato sintético. A -D-glicosidase de Artemia franciscana apresentou ação degradativa sobre celobiose, lactose e sobre o substrato sintético -nitrofenil--D-glicopiranosídeo, indicando potencial uso desta enzima na indústria principalmente para produção de bioetanol (produção de álcool a parti de celulose) e produção de leite hidrolisado (leite destituído de lactose)Dissertação Purificação, caracterização e análise da atividade bioinseticida, de um inibidor de tripsina em sementes de catanduva (Piptadenia moniliformis)(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-10-20) Cruz, Ana Celly Bezerra; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/6635163328842232; Oliveira, Antônia Elenir Amâncio; ; http://lattes.cnpq.br/2207461519012659; Matta, Luciana Duarte Martins da; ; http://lattes.cnpq.br/2752887804614967; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=nullUm inibidor de tripsina da família Kunitz (PmTI) foi purificado de sementes de Piptadenia moniliformis, uma árvore da sub-família Mimosoideae, através da precipitação com ácido tricloroacético (TCA), cromatografia de afinidade com tripsina acoplada em sepharose, coluna DEAE- celulose(troca iônica) e Superose 12 (exclusão molecular) em sistema FPLC/AKTA. O inibidor possui massa molecular de 25 kDa como confirmado através de SDS-PAGE e cromatografia de exclusão molecular. A seqüência do N-terminal deste inibidor mostrou alta homologia com outros inibidores da família Kunitz. Este também é estável as variações de temperatura e pH, e apresentou um pequeno decréscimo na sua atividade quando incubado com DTT na concentração de 100 mM por 120 minutos. A inibição da tripsina foi do tipo competitiva com Ki de 1,57x10-11 mM. A atividade da tripsina foi inibida efetivamente com percentual de inibição de 100%, entre as outras enzimas testadas não foi detectada inibição para a bromelaína, foi fracamente inibidor da elastase pancreática (3,17% de inibição), inibiu em 76,42% elastase de neutrófilos, inibiu de forma moderada quimotripsina e papaína com percentual de inibição de 42,96% e 23,10%, respectivamente. Ensaios in vitro foram realizados com as proteinases digestivas de Lepidóptera, Coleóptera e Díptera. Vários graus de inibição foram encontrados. Para Anthonomus grandis e Ceratitis capitata a inibição foi de 89,93% e 70,52%, respectivamente, e as enzimas de Zabrotes subfasciatus e Callosobruchus maculatus foram inibidas com percentuais de 5,96% e 9,41% respectivamente, e as enzimas de Plodia interpunctella e Castnia licus foram inibidas com percentuais de 59,94% e 23,67%, respectivamente. No ensaio in vivo, foi observada redução no desenvolvimento de larvas em 4º ínstar de C. capitata, quando PmTI foi adicionado à dieta artificial, obtendo WD50 de 0,30% e LD50 0,33% . Estes resultados sugerem que este inibidor possa ser um forte candidato para programas de melhoramentos de plantas via transgeniaDissertação Purificação, caracterização e atividade bioinseticida de um inibidor de tripsina de sementes de Crotalaria pallida(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2004-12-20) Gomes, Carlos Eduardo Maia; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/8235024740448274; Vidal, Márcia Soares; ; http://lattes.cnpq.br/3036544314910366; Braz, Regina de Fátima dos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/9442000157600332Um inibidor de proteinase foi isolado de sementes de Crotalaria pallida por fracionamento com sulfato de amônio, cromatografia de afinidade em Sepharose com tripsina acoplada e precipitação com ácido tricloroacético (TCA). O inibidor de tripsina, denominado ITC, possui massa molecular de 32,5 kDa determinada por SDS-PAGE e é composto por duas subunidades, uma de 25,7 e outra de 5,6 kDa, ligadas por pontes dissulfeto; uma característica típica da família de inibidores de Kunitz. ITC foi estável até 50°C e a 100°C sua atividade residual foi cerca de 60%. ITC também foi estável em valores de pHs variando de 2 a 12. A inibição da tripsina por ITC é do tipo não-competitivo, com um Ki de 8,8 x 10-7M. ITC inibe fracamente outras proteinases serínicas como quimotripsina e elastase. A inibição da papaína (44%), uma proteinase cisteínica, foi indicativa da bifuncionalidade de ITC. Ensaios in vitro contra proteinases digestivas de vários insetos praga das ordens Lepidoptera, Diptera e Coleoptera foram realizados. ITC inibiu em cerca de 100% enzimas digestivas de Ceratitis capitata (mosca-das-frutas), Spodoptera frugiperda (lagarta do cartucho do algodão), e Alabama argillacea (curuquerê do algodão). ITC também inibiu em 74,4% enzimas digestivas de Callosobruchus maculatus (broca do feijão) uma praga da ordem Coleoptera. ITC, quando adicionado a dietas artificiais, afetou fracamente o desenvolvimento de larvas de C. capitata e teve um WD50 de 2,65% contra larvas de C. maculatusDissertação Purificação, caracterização e avaliação da atividade antiproliferativa de um inibidor de quimotripsina tipo kunitz de semente de Eryhrina velutina(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2010-02-19) Lucena, Sheila Varela; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/2148891529881163; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null; Justo, Giselle Zenker; ; http://lattes.cnpq.br/9147445236159161Um inibidor de quimotripsina do tipo Kunitz foi purificado de sementes de Erythrina velutina por fracionamento com sulfato de amônio, cromatografias de afinidade Tripsina-Sepharose, Quimotripsina-Sepharose e cromatografia de Fase Reversa C- 18 no sistema FPLC/AKTA. O inibidor, denominado de EvCI, apresentou uma massa molecular de 17 kDa, determinada por SDS-PAGE. A análise por eletroforese bidimensional (2D) revelou quatro isoinibidores (valores de pI: 4,42, 4,63, 4,83 e 5,06). Todos os isoinibidores apresentaram massa molecular de 17 kDa. A sequência aminoacídica dos peptídeos oriundos da digestão enzimática de EvCI analisada por MALDI-TOF-MS apresentou 100% de identidade com o inibidor de quimotripsina ECl de Erythrina variegata. EvCI inibiu competitivamente a atividade de quimotripsina com Ki de 4 x10-8 M, mas não inibiu tripsina, elastase pancreática, bromelaína ou papaína. Contudo, inibiu elastase de neutrófilos em 35,91 %. A atividade inibitória de EvCI sobre quimotripsina foi estável em uma ampla faixa de pH e temperatura. Na presença de 100 mM de DTT por 120 min, o inibidor perdeu 50% de sua atividade. A citotoxicidade do inibidor foi avaliada nas linhagens de células HeLa, MDA, HepG2, K562 e PC3 após exposição a concentrações variando de 0,0005 a 200 μg/mL, por 72 horas. O EvCl inibiu o crescimento celular de células HeLa com um IC 50 de 50 μg/mL. Os resultados obtidos na avaliação de indução de morte celular e efeitos sobre o ciclo celular em células HeLa, indicam que o principal efeito do inibidor é a indução de parada do ciclo celular, sendo, portanto, citostático. Os dados sugerem que o EvCl pode ser um composto promissor para ser estudado no futuro como agente citostático na terapia antitumoral combinadaDissertação Vicilinas de sementes de leguminosas selvagens:purificação, caracterização, efeito de deletério e mecanismo de ação para bruquídeos e para fungos fitopatogênicos(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2006-06-27) Teixeira, Fabiano de Moura; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/8429252367963369; Santos, Elizeu Antunes dos; ; http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4782221T9&dataRevisao=null; Sá, Maria de Fátima Grossi de; ; http://lattes.cnpq.br/3058512809761818Sementes de leguminosas das espécies Crotalaria pallida, Erythrina veluntina e Enterolobium contortisiliquum tiveram suas frações globulínicas isoladas. As globulinas não apresentaram atividade de inibidores para as enzimas tipo serínicas, cisteínicas, aspárticas e para as amilases de homogenatos intestinais de larvas de Callosobruchus maculatus e Zabrotes subfasciatus. Os testes de atividades hemaglutinantes indicaram que apenas a globulina de Erytrina veluntina apresentou contaminação com lectinas com afinidade para eritrócitos humanos do tipo A, B e O. As vicilinas foram então purificadas usando-se duas cromatografias de filtração em gel, Sephacryl S-300 seguido de uma Sephacryl S-200 calibrada com marcadores de massa molecular conhecidos. Vicilinas de C. pallida (CpV) e E. veluntina (EvV) apresentaram massa molecular de 124,6 kDa e a de E. contortisiliquum (EcV) com massa molecular de 151 kDa..Eletroforese desnaturante mostrou que CpV possui 4 subunidades de massas moleculares aparentes de 66, 63, 57, 45 kDa; a de EvV com duas subunidades de massa molecular aparente de 66,2 e 63,8 kDa e EcV três subunidades de massa molecular aparente de 54,9 kDa. Essas proteínas mostraram ser homogêneas por eletroforese nativa com bandas únicas, onde CpV revelou ser a proteína menos ácida. Todas as vicilinas são glicoproteínas,com conteúdo de carboidrato variando de 1 a 1,5%. Bioensaios foram feitos para determinar o efeito deletério das vicilinas para C. maculatus e Z. subfasciatus. Cpv, EvV e EcV apresentaram WD50 de 0,28, 0,19 e 1,03%; LD50 de 0,2, 0,26 e 1,11% para C. maculatus, respectivamente . As curvas dose resposta para Cpv, EvV e EcV para Z. subfasciatus apresentou WD50 de 0,12, 0,14 e 0,65%; e LD50 de 0,09, 0,10 e 0,43%, respectivamente. Ensaios digestórios utilizando se enzimas dos intestinos médio de bruquídeos mostraram que as vicilinas são resistentes à proteólise, dentre elas destaca-se EcV, que mesmo depois de incubadas por 24 horas não foram hidrolisados pelas enzimas de de C. maculatus. Nos ensaios para fungos fitopatógenos apenas EcV foi capaz de inibir a germinação de esporos de Fusarium solani à concentração de 10 e 20 µg. O mecanismo de ação proposto para as vicilinas foi baseado na propriedade que essas proteínas tiveram de se ligarem a quitina ou estruturas quitinosas presentes nos intestinos médios das larvas associado à baixa digestibilidade destas proteínas para enzimas dos insetosArtigo α-Amylase inhibitors from ficus Sp. seeds and their activities towards coleoptera insect pests(Protein & Peptide Letters, 2004-04) Bezerra, Ingrid Wilza Leal; Teixeira, Fabiano de Moura; Oliveira, Adeliana Silva de; Araújo, Carina Leite de; Leite, Edda Lisboa; Queiroz, Karla Cristiana de Souza; Sales, Maurício Pereira dea-Amylase Inhibitors were isolated from Ficus sp. (Gameleira) seeds by acetone fractionation and Sephadex G-50. Two inhibitors (a-PPAI and a-ZSAI) were tested against a-amylases from coleopteran larvae. a-PPAI was active to a-amylases of Callosobruchus maculatus (52%) and Zabrotes subfasciatus (53%). a-ZSAI was strongly active to Z. subfasciatus (100%) of and Mimosestes mimosae (98%). The a-ZSAI is a glycoprotein of ~50kDa with an IC50 value of 0.074 mg ml -1