PPgBBM - Doutorado em Bioquímica e Biologia Molecular

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Abordagem em bioquímica quântica aplicados à modulação de SIRT6 e PIM1: desvendando novas estratégias terapêuticas com flavonoides
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2025-01-24) Matias, Érika Geicianny de Carvalho; Fulco, Umberto Laino; Oliveira, Jonas Ivan Nobre; https://orcid.org/0000-0003-1646-921X; http://lattes.cnpq.br/2461374517882321; https://orcid.org/0000-0002-4528-9878; http://lattes.cnpq.br/9579151361576173; http://lattes.cnpq.br/1220783177888532; Silva Júnior, Edilson Dantas da; Filho, Antonio de Macedo; Bezerra, Katyanna Sales; Ribeiro Júnior, Luiz Antonio
As doenças metabólicas e os cânceres afetam milhões de pessoas em todo o mundo caracterizando um problema de saúde e bem estar da sociedade. Nesse cenário surgem duas proteínas SIRT6 e PIM1, essas macromoléculas tem se destacado como potenciais alvos terapêuticos frente a essas patologias, uma vez que suas funções regulatórias estão diretamente associadas à prevenção dessas doenças. SIRT6 é uma deacilase dependente de NAD+ e sua ativação tem potencial contra doenças metabólicas e relacionadas ao envelhecimento, em contrapartida a sua inibição é considerada uma promessa na terapia contra o câncer. A investigação da modulação dessa proteína por moléculas específicas destaca-se como uma área promissora. PIM1 é um proto-oncogene superexpresso em diversos tipos de câncer humano e sua inibição é considerada um alvo promissor para a terapia do câncer. Aqui, exploramos a modulação de SIRT6 com os flavonoides quercetina (QUE) e seu derivado isoquercetina (ISO), além da galato catequina (GC) e da susbstância tricostanina-A (TSA); bem como da proteína PIM1 com os flavonoides quercetina (QUE), miricetina (MIC) e pentahidroxiflavona (PTH), proporcionando uma visão detalhada das interações moleculares que levam à ativação e/ou inibição dessas proteínas. Para isso empregamos métodos computacionais na perspectiva da Modelagem Molecular por meio da técnica do Fracionamento Molecular com Caps Conjugados (MFCC) e em conformidade com os parâmetros de cálculos da Teoria do Funcional da Densidade (DFT). Essas avaliações se deram em um raio de até 10,0 Å de distância dos moduladores. A análise energética do complexo SIRT6- moduladores demonstrou que as substâncias ativadoras (GC) e (TSA) foram mais expressivas em comparação com as moléculas inibidoras (QUE) e (ISO). Em contrapartida, para o complexo PIM1-inibidores o flavonoide que apresentou interação mais expressiva foi a (PTH) seguido da (QUE) e da (MIC). Nossos resultados fornecem evidências relevantes para o desenvolvimento racional de novos fármacos direcionados para SIRT6 e PIM1 com potencial para impactar a regulação dessas proteínas e abrir perspectivas na pesquisa de novas abordagens terapêuticas para doenças metabólicas e câncer.
Ação antioxidante e efeito neuroprotetor de polissacarídeos sulfatados
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-12-04) Lucena, Alessandra Marinho Miranda; Câmara, Rafael Barros Gomes da; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0003-2252-1221; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; https://orcid.org/0000-0001-5109-1991; http://lattes.cnpq.br/9200036511632745; https://orcid.org/0000-0002-1698-5428; http://lattes.cnpq.br/5486564758103808; Scortecci, Katia Castanho; Guzen, Fausto Pierdona; Santos, Pablo de Castro; Ferreira, Éder Galinari
As doenças neurodegenerativas são produtos de mecanismos biológicos multifatoriais, que envolvem causas exógenas e endógenas. Em decorrência do aumento da expectativa de vida e do crescimento previsto de condições demenciais, há uma crescente preocupação na busca de prevenção e tratamento mais efetivos para a neurodegeneração. O estresse oxidativo tem se mostrado um fator importante no desenvolvimento e na progressão dessas doenças, devido a características intrínsecas ao tecido nervoso, como a baixa capacidade de regeneração e a alta demanda energética. As algas marinhas são fontes de diversas moléculas bioativas, com destaque para os polissacarídeos sulfatados (PS). Esses compostos são importantes para a sobrevivência das algas e possuem atividades biológicas significativas, como a antioxidante e a anti-inflamatória. Tais propriedades podem ser úteis no tratamento de doenças neurodegenerativa. Os PS das algas têm se mostrado uma promissora alternativa para a neuroproteção. Foram identificadas 9 espécies de algas cujos PS apresentam ação antioxidante em diferentes condições. E foram obtidas 44 frações ricas em polissacarídeos sulfatados (FRP). Essas FRP passaram por avaliação de sua citotoxicidade, em células Neuro-2A, em diferentes concentrações (0,1; 0,25; 0,5 e 1 mg/mL). A partir de cada FRP foram selecionadas duas concentrações, sendo uma mais alta e outra mais baixa, que obtiveram valores de redução de MTT igual ou superior a 80 %, para análise de proteção contra o dano oxidativo induzido pelo peróxido de hidrogênio. Para selecionar as FRP que seriam avaliadas quanto aos possíveis mecanismos de proteção empregados, foram levados em consideração os resultados dos parâmetros de rendimento, de efeito citotóxico e do potencial neuroprotetor em cultivo celular, para a construção de um Score. Os possíveis mecanismos envolvidos, foram analisados através da determinação do potencial de sequestro de peróxido de hidrogênio; e do efeito sobre a expressão de genes da via antioxidante (Keap1, Nfr2, Sod1, Cat, Gpx, Hmox1, Gclc, Gclm) e das subunidades do fator de transcrição NFκβ (Nfkb1 e Rela). Além disso foi avaliada a capacidade de proteção antioxidante em modelo in vivo (Zebrafish). Das 44 FRP avaliadas, 42 não apresentaram efeito citotóxico contra células Neuro-2A, em pelo menos uma das concentrações avaliadas. Todas as algas avaliadas tiveram FRP que protegeram as células Neuro-2A de dano oxidativo induzido por peróxido de hidrogênio. Além disso, através do Score, foi possível observar que as algas marrons tiveram os melhores resultados. Com base nesses dados, foram selecionadas 4 FRP (DJ 1.2, SF 0.5, SS 1.3 e DM 1.0) para a avaliação dos possíveis mecanismos envolvidos. A partir da obtenção dos dados demonstram que os mecanismos utilizados por essas amostras vão desde atuação direta sobre as moléculas oxidantes até a modulação de mecanismos antioxidantes endógenos, promovendo aumento na expressão de genes relacionados a tradução de enzimas antioxidantes e redução na expressão de gene relacionado a uma resposta pró-inflamatória e pró-oxidante. Além disso, esses polissacarídeos se mostraram capazes de promover proteção contra o estresse oxidativo em modelo in vivo. Esses dados são importantes para o desenvolvimento das futuras avaliações dessas moléculas, tendo em vista que trouxeram conhecimento sobre seu potencial efeito neuroprotetor, seus possíveis mecanismos e sua atividade antioxidante em organismos mais complexos.
Ações antibacteriana, moduladora de antibióticos e antiproteásicas de frações proteicas da semente de catingueira (Poincianella pyramidalis Tul.)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-08-30) Cruz, Joelton Igor Oliveira da; Santos, Elizeu Antunes dos; https://orcid.org/0000-0003-4372-2161; http://lattes.cnpq.br/6762251930590306; https://orcid.org/0000-0001-5751-7682; http://lattes.cnpq.br/2448189217304566; Câmara, Rafael Barros Gomes da; Veras, Bruno Oliveira de; Oliveira, Maria Tatiana Alves; Santos, Paula Ivani Medeiros dos
A resistência bacteriana, bem como os distúrbios inflamatórios, são problemas de saúde pública expressivos que levam milhares de pessoas aos hospitais todos os anos, sendo muitas vezes necessários vários dias de internação para o tratamento, gerando custos excessivos e, por vezes, sem resolução do problema. Considerando a importância da descoberta de novas substâncias que mitiguem esses problemas, este trabalho teve como objetivo avaliar o extrato bruto e frações proteicas da semente de Poincianella pyramidalis (Tul.) quanto às atividades antibacteriana, moduladora de antibióticos, e inibitória de proteases. Os extratos proteicos foram obtidos com tampão Tris-HCL 0,05M, pH 7,5, e posterior fracionamento nas faixas de saturação: 0-30% (F1), 30-60% (F2) e 60-90% (F3) de sulfato de amônio. O perfil eletroforético revelou diversas bandas proteicas entre 12 e 225 KDa. A fração enriquecida em inibidor (FE) foi obtida utilizando apenas uma cromatografia de afinidade em Tripsina-Sepharose após a extração. O teste da atividade antimicrobiana foi realizado através do ensaio de microdiluição e a ação moduladora dos antibióticos ampicilina, norfloxacino e gentamicina, utilizando uma concentração subinibitória CIM/8. Embora as amostras não tenham apresentado ação antimicrobiana direta sobre as linhagens ATCC Escherichia coli, Staphylococcus aureus e S. aureus resistente a meticilina (MRSA), observou-se que, em uma concentração de 128 µg/mL, as amostras associadas aos diferentes antibióticos (aminoglicosídeo, β-lactâmico e fluoroquinolona) tiveram uma ação sinérgica contra as cepas multirresistentes de E. coli, S. aureus e Pseudomonas aeruginosa. Enquanto as demais amostras inibiram a ação das serinoproteases testadas em porcentagens acima de 80%, FE reduziu 50% das atividades das enzimas tripsina, elastase neutrofílica humana (ENH) e quimotripsina, nas concentrações de 0,017, 0,023 e 0,156 µg/µL, respectivamente, e sua atividade antitripsina foi mantida em altas temperaturas (80 ºC) e ampla faixa de pH (2 a 12). Não foi observada atividade hemolítica em concentrações até 10x maiores que a IC50, viabilizando assim, o seu uso em possíveis preparações farmacológicas. Desta forma, conseguimos separar de forma relativamente simples, produtos derivados das sementes de P. pyramidalis com atividades relevantes no contexto clínico, considerando o seu potencial de aplicação no combate a infecções causadas por bactérias resistentes, bem como nos distúrbios de proteases inflamatórias, e com redução dos custos do tratamento.
Análise do potencial inibitório do ácido clorogênico e do ácido rosmarínico frente aos efeitos da peçonha da serpente Bothrops Leucurus Wagler (1824)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-07-28) Silva, Diana Pontes da; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; https://orcid.org/0000-0001-5403-0609; http://lattes.cnpq.br/6485545795872191; Sousa Júnior, Francisco Canindé de; https://orcid.org/0000-0003-2042-4348; http://lattes.cnpq.br/3721560802857426; Luna, Karla Patrícia de Oliveira; Soares, Luiz Alberto Lira; Lima, Maira Conceição Jerônimo de Souza
Os acidentes ofídicos representam um sério problema de saúde pública em países tropicais. A serpente Bothrops leucurus é uma das principais responsáveis pelos acidentes ofídicos no Nordeste brasileiro, porém esta espécie não está incluída no pool utilizado na produção do soro antiofídico. Considerando as limitações do soro antiofídico, diversos estudos tem sido realizados a fim de desenvolver tratamentos complementares para o ofidismo e, neste contexto, as plantas constituem uma importante fonte de compostos bioativos. O ácido clorogênico e o ácido rosmarínico são moléculas derivadas do metabolismo secundário de plantas, com diversas atividades biológicas descritas e potencial antiofídico ainda pouco explorado. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar o potencial inibitório dos ácidos clorogênico e rosmarínico frente aos efeitos da peçonha de B. leucurus. Inicialmente, foi avaliada a capacidade de neutralização in vitro das atividades enzimáticas da peçonha. Em seguida, foram realizados testes in vivo para verificar a inibição dos ácidos frente às atividades hemorrágica, edematogênica, miotóxica e quantificação de marcadores inflamatórios, assim como a análise de marcadores bioquímicos, hemostáticos, hematológicos, e verificação do grau de peroxidação lipídica nos tecidos renal e hepático. Por último, a capacidade de interação in sílico dos inibidores com duas classes de toxinas foi avaliada. Os resultados demonstraram que os ácidos clorogênico e rosmarínico foram eficazes em inibir as atividades fosfolipásica (21% e 60%), proteolítica (39% e 60%), hialuronidásica (59% e 75%) e coagulante (p < 0,0001), respectivamente, bem como foram eficazes em prevenir a degradação do fibrinogênio. Nos ensaios in vivo, os inibidores atenuaram o edema (p < 0,01), reduzindo os níveis de mieloperoxidase (p < 0,001) e das interleucinas IL-6 (p < 0,0001) e IL-1β (p < 0,001). Os compostos também inibiram as ações hemorrágica (p < 0,0001) e miotóxica (p < 0,001 – ácido clorogénico, p < 0,0001 – ácido rosmarínico) da peçonha. Nos marcadores bioquímicos séricos, os inibidores atenuaram as alterações nos níveis de ureia (p < 0,01 – ácido clorogênico e p < 0,05 – ácido rosmarínico), creatinina (p < 0,0001), ácido úrico (p < 0,0001), alanina aminotransferase (p < 0,05), aspartato aminotransferase (p < 0,001- ácido clorogênico e p < 0,05 - ácido rosmarínico), amilase (p < 0,01), proteínas totais (p < 0,01), creatina quinase (p < 0,01) e lactato desidrogenase (p < 0,0001). Ainda, ambos os compostos diminuíram os níveis de peroxidação lipídica nos tecidos hepático (p < 0,001) e renal (p < 0,0001). Ao avaliar os parâmetros hemostáticos, apenas o ácido rosmarínico foi capaz de reduzir os efeitos sobre o fibrinogênio circulante (p < 0,0001) e contagem de plaquetas (p < 0,0001). Os estudos computacionais indicaram que estes inibidores tem capacidade de interagir com toxinas da classe das fosfolipases A2 e das metaloproteases. Tomados em conjunto, os resultados obtidos evidenciaram o potencial antiofídico dos ácidos clorogênico e rosmarínico, que apresentaram, em geral, maior eficiência de inibição do que o soro antiofídico. Assim, ambos os inibidores constituem candidatos promissores ao desenvolvimento de futuros adjuvantes a serem utilizados para complementar a soroterapia disponível atualmente.
Anticorpos anti-flaviviridae nas síndromes de Guillain-Barré e congênita associada à infecção pelo vírus Zika
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-10-09) Souza, Cássio Ricardo de Medeiros; Jerônimo, Selma Maria Bezerra; http://lattes.cnpq.br/7120263570947836; https://orcid.org/0000-0002-7783-9862; http://lattes.cnpq.br/1594370808039696; Costa, Eliardo Guimarães da; http://lattes.cnpq.br/3160805152538713; Egito, Eryvaldo Socrates Tabosa do; Carvalho, Lucas Pedreira de; Carvalho, Luiz Bezerra de
Entre 2015 e 2016, o Brasil experimentou a maior epidemia do vírus Zika (ZIKV) já registrada até então, que se tornou problema de saúde pública não só pelo grande número de casos, mas principalmente pelo surgimento de outros quadros clínicos de maior gravidade associados à infecção, como a Síndrome de Guillain-Barré (SGB) e a Síndrome Congênita do ZIKV (SCZ). A avaliação da eficácia do diagnóstico sorológico e do perfil de resposta de anticorpos são duas grandes problemáticas no contexto da infecção por ZIKV. O diagnóstico sorológico é realizado principalmente através da detecção de anticorpos anti-NS1, mas há evidências de reatividade cruzada com outros flavivírus, prejudicando o diagnóstico específico da infecção por ZIKV. É de grande importância também o estudo da resposta e cinética de anticorpos anti-ZIKV pós infecção, a fim de determinar a existência de resposta de longo prazo e sua capacidade protetora. Essa tese, portanto, se debruça sobre essas duas problemáticas. Inicialmente, avaliou-se a eficácia da sorologia baseada em NS1 para detecção de IgM, IgG total e IgG3 anti-ZIKV e anti-DENV, e sua aplicação no diagnóstico da infecção prévia por ZIKV em casos de SGB. Observou-se a presença de anticorpos anti-ZIKV e anti-DENV em pacientes que desenvolveram SGB, avaliados entre 2009 e 2018 residentes de área endêmica para DENV. A presença desses anticorpos em indivíduos que desenvolveram a síndrome anteriormente à introdução do ZIKV no território é um indicativo da ocorrência de reatividade cruzada entre anticorpos anti-flaviviridae. Os achados indicam que a sorologia para detecção de IgM e IgG total anti-NS1, apesar de apresentarem sensibilidade considerável, não possuem especificidade suficiente para possibilitar o diagnóstico diferencial da infecção por ZIKV. Por sua vez, a sorologia para detecção de IgG3 anti-NS1 possui melhor performance, tornando possível a identificação de casos de SGB associados à infecção por ZIKV. Em seguida, determinou-se a presença de anticorpos anti-NS1 e anti-E contra ZIKV e/ou DENV, bem como a presença de anticorpos neutralizantes anti-ZIKV, em mulheres que deram à luz crianças com SCZ avaliadas em dois períodos distintos, entre 8 e 24 meses pós-parto e entre 25 e 44 meses pós-parto, a fim de identificar se há resposta de anticorpos protetores de longo prazo. Os resultados indicam presença significativa de anticorpos anti-NS1 e anti-E, bem como de anticorpos neutralizantes anti-ZIKV, em mulheres avaliadas entre 8 e 24 meses pós-parto, interpretados aqui como sinal exposição prévia a ZIKV. No segundo grupo, não foi possível identificar presença significativa de anticorpos anti-NS1 e anti-E, sugerindo decaimento dessa resposta ao longo do tempo; entretanto, registrou-se presença significativa de anticorpos neutralizantes no soro dessas mulheres. A atividade neutralizante contra ZIKV está relacionada à presença de anticorpos antiZIKV no primeiro grupo e, no segundo, esse fenômeno se correlaciona com a presença de anticorpos anti-DENV, sugerindo possível proteção cruzada entre anticorpos anti-ZIKV e anti-DENV. Estudos mais aprofundados são necessários para uma melhor caracterização do papel de anticorpos IgG3 como marcadores específicos de infecção recente por ZIKV, bem como o papel de anticorpos anti-NS1 e anti-E de longa duração como indutores de atividade neutralizante anti-ZIKV, a fim de prover melhores estratégias para o diagnóstico sorológico específico da infecção e um melhor entendimento da cinética e papel protetor de anticorpos anti-ZIKV.
Aplicação do sequenciamento de leituras curtas no estudo da variabilidade genômica de organismos relevantes para a carcinicultura
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-12-01) Soares, Paulo Eduardo Toscano; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; https://orcid.org/0000-0002-1341-4814; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; https://orcid.org/0000-0002-4159-8569; http://lattes.cnpq.br/1232677110942724; Dalmolin, Rodrigo Juliani Siqueira; Sakamoto, Tetsu; Ortega, José Miguel; Farias, Sávio Torres de
Nas últimas duas décadas, o sequenciamento de leituras curtas se tornou uma ferramenta central nos estudos genômicos permitindo a rápida e precisa descoberta de sequências de DNA em alta quantidade. Isso viabilizou a aplicação do sequenciamento em atividades de interesse econômico como a carcinicultura permitindo, por exemplo, a identificação de patógenos e a genotipagem, tanto de centenas a milhares de camarões simultaneamente quanto a detecção de variantes genéticas desses patógenos. Esse sequenciamento pode também auxiliar na descoberta de marcadores genéticos, como os microsatélites e SNPs, que podem ser reunidos em um painel de genotipagem, tornando escalável e reduzindo o custo por amostra da sua aplicação. Especificamente na carcinicultura, esta tecnologia tem se mostrado extremamente valiosa, principalmente para o estudo do genoma de camarões. As análises dos genomas nuclear e mitocondrial fornecem informações cruciais sobre origem, adaptabilidade e outros aspectos evolutivos que são vitais para a otimização da criação de camarões. Devido à alta profundidade de cobertura dos desses sequenciamentos, é possível capturar a diversidade genética nas amostras, permitindo descobrir variações genéticas em populações mitocondriais (heteroplasmia) ocorrendo nos camarões e nos patógenos, como os vírus que os acometem. Surge assim, uma oportunidade única de se estudar os impactos dessa diversidade genética no uso de marcadores mitocondriais e na descoberta de variantes e quasispécies virais. Isso se traduz em práticas de manejo mais informadas, minimizando surtos e otimizando a saúde dos camarões. Já a implementação de painéis baseados em SNPs é um claro exemplo do impacto da genotipagem, demonstrando como a tecnologia pode ser usada para melhorar as práticas de seleção genética em carcinicultura. Neste trabalho, avaliou-se o impacto da diversidade genética mitocondrial, em um vírus que acomete a carcinicultura e no camarão por abordagens de bioinformática. Primeiro, foram avaliadas a ocorrência de heteroplasmia analisando-se dados do sequenciamento do músculo de um único camarão, detectando padrões de variabilidade e conservação nos mitogenomas desse indivíduo, além de comparar essa variabilidade interna com a observada entre outros mitogenomas e observar o impacto em marcadores na região de controle, muito utilizada em estudos populacionais. Segundo, avaliou-se a variabilidade genética do vírus da mionecrose infecciosa do camarão obtido em tanques em situação de surto viral, obtendo-se o genótipo da variante mais prevalente para análises filogenéticas, revelando sua possível origem e relação com demais linhagens existentes, e de variantes secundárias, avaliando a ocorrência de quasispécies virais. Por último, a partir de dados previamente existentes, foi desenvolvido um painel de 25 marcadores de SNPs (15 genômicos e 10 mitocondriais) objetivando a genotipagem a baixo custo do camarão Penaeus vannamei por amplificação por PCR multiplex seguido de análises de parentesco in silico. Atualmente este último projeto encontra-se em andamento e já teve os iniciadores avaliados, restando agora seguir com o sequenciamento e as análises de bioinformática. Em suma, este trabalho mostrou que o sequenciamento de leituras curtas é capaz de capturar a diversidade genética, trazendo novas percepções para a carcinicultura ao expor o impacto em marcadores, a variabilidade viral e, futuramente, o impacto dessa variabilidade em painéis de genotipagem.
Aspectos funcionais de peptídeos vegetais com efeito anti-inflamatório na obesidade e avaliação estrutural do inibidor de tripsina kunitz de sementes de tamarindo
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-10-25) Medeiros, Amanda Fernandes de; Morais, Ana Heloneida de Araújo; Maciel, Bruna Leal Lima; 96256192320; http://lattes.cnpq.br/5790541670952158; http://lattes.cnpq.br/1233944493334651; http://lattes.cnpq.br/9221417221401426; Oliveira, Hermógenes David de; http://lattes.cnpq.br/4151792037839111; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; Machado, Richele Janaina Araújo; http://lattes.cnpq.br/1352905640097175; Lima, Severina Carla Vieira Cunha; http://lattes.cnpq.br/8818927353248941
A inflamação subclínica no sobrepeso e na obesidade altera diversas vias metabólicas, com reforço positivo para o acúmulo de mais tecido adiposo e alteração no metabolismo energético. Diversos estudos têm avaliado o efeito anti-inflamatório e imunomodulador de proteínas hidrolisadas e peptídeos vegetais, sendo necessário, contudo, explorar os mecanismos de ação desses efeitos. Dessa maneira, no primeiro capítulo desta tese, foi apresentada na revisão narrativa a compreensão dos mecanismos de ação de proteínas hidrolisadas e peptídeos vegetais sobre a inflamação acometida pelo excesso de tecido adiposo. Para isso, realizou-se uma busca nas bases de dados, selecionando estudos que envolviam vias e respostas metabólicas alvos de proteínas hidrolisadas ou peptídeos de origem vegetal. Viu-se que os mecanismos perpassam a inibição da via NF-B, redução do estresse oxidativo, estímulo à via da PI3K-AKT e de enzimas relacionadas com a detoxificação (superóxido dismutase e catalase), assim, culminando na redução de citocinas e adipocinas inflamatórias, bem como a polarização de macrófagos para o fenótipo M2. No segundo capítulo foram apresentados os estudos in vitro e de simulação computacional (in silico) com o inibidor de tripsina purificado de sementes de tamarindo (Tamarindus indica L.) (ITTp). Essa proteína tem sido estudada in vitro e em estudos préclínicos para o tratamento da obesidade, de suas complicações e de comorbidades associadas. O ITTp foi sequenciado de novo por MALDI-TOF/TOF, foi obtida a sua modelagem por homologia e avaliada a interação com a enzima tripsina (PDB ID 2PTN) por meio de simulação de dinâmica molecular (DM) em condições controladas de temperatura, pressão e presença de água. Foram identificados 75 resíduos de aminoácidos adicionais da sequência do ITTp. A modelagem por homologia foi realizada pelo CONCOORD e validada pelo MolProbity e as quatro melhores conformações da modelagem foram submetidas à DM. A conformação n° 287 do modelo nº 56 foi selecionada, considerando a análise RMSD e a energia de interação (-301,0128 kcal.mol1 ). Os resíduos Ile (54), Pro (57), Arg (59), Arg (63) e Glu (78) do ITTp apresentaram menor energia de interação e por isso maior interação com a enzima tripsina (PDB ID 2PTN). Dentre esses, os resíduos de Arg (59 e 63) estavam, principalmente, envolvidos em seu mecanismo de ligação de modo eletrostático. Esses resultados favorecem a continuidade de estudos com o ITTp para aplicações em estudos pré-clínicos e clínicos na área de saúde, visando contribuir no controle de graves problemas de saúde pública, como a obesidade. Por fim, considerando os potenciais alvos moleculares terapêuticos apontados nas vias metabólicas inflamatórias para peptídeos vegetais no tratamento da obesidade, revelados por meio da revisão narrativa, além do sequenciamento, modelagem e dinâmica molecular do ITTp com a tripsina, por meio dos estudos in silico, esta tese aprofunda os conhecimentos sobre o ITTp e gera suporte para estudos futuros.
Atividade in vitro e in vivo de peptídeos antimicrobianos análogos incorporados à nanopartículas de PLGA contra Staphylococcus aureus
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-12-07) Carmo, Bruno Amorim do; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; https://orcid.org/0000-0003-0417-8677; http://lattes.cnpq.br/5109295884451757; Silva, Marcelo de Sousa da; https://orcid.org/0000-0002-1000-0149; http://lattes.cnpq.br/1295430560645312; Silva Júnior, Arnóbio Antônio da; Carvalho, Eneas de; Castro, Mariana de Souza
O surgimento de microrganismos multirresistentes consiste em um grave problema de saúde pública mundial que limita as alternativas terapêuticas e revela a necessidade da busca urgente por novos agentes antimicrobianos. A peçonha do escorpião Tityus stigmurus é uma rica fonte de componentes biologicamente ativos, incluindo peptídeos antimicrobianos com elevado potencial terapêutico, como é o caso da Stigmurina. A estrutura da Stigmurina foi utilizada como protótipo para obtenção de moléculas mais potentes, sendo realizadas modificações na sua estrutura, gerando 31 análogos (patente BR102015029044-6). Neste estudo, foi caracterizado por ressonância magnética nuclear (RMN), investigada a estabilidade e avaliada a ação antibacteriana in vitro e in vivo de dois peptídeos análogos denominados de StigA25 e StigA31. Além da notável atividade antimicrobiana já descrita em estudo anterior, os peptídeos StigA25 e StigA31 apresentaram ação hemolítica dependente de concentração em relação ao peptídeo protótipo. A fim de reduzir a citotoxicidade, aumentar a estabilidade e potencializar a eficiência terapêutica desses peptídeos, foi investigado o efeito da associação desses componentes bioativos à nanopartículas de poli(ácido lático-co-ácido glicólico) (PLGA). StigA25 e StigA31 revelaram uma conformação predominante em α-hélice por RMN, com elevada estabilidade estrutural em diferentes condições de temperatura, pH e na presença de sais por dicroísmo circular. A associação destes peptídeos às nanopartículas de PLGA possibilitou um nanosistema estável com alto índice de incorporação dos peptídeos, atividade antimicrobiana equivalente aos dos peptídeos livres e relevante redução da toxicidade. A microscopia eletrônica de varredura e transmissão demonstrou que tanto os peptídeos livres quanto nanoparticulados atuam rompendo a membrana celular bacteriana. Tanto no modelo de sepse em camundongos, quanto em modelo de infecção por S. aureus em Galleria mellonella, os peptídeos livres e nanoparticulados foram eficazes em controlar o processo infeccioso. Portanto, este estudo revela o elevado potencial terapêutico do StigA25 e StigA31 associados a nanosistema de PLGA, indicando o uso deste nanocarreador como uma ferramenta promissora para a aplicação terapêutica destas moléculas no desenvolvimento de novos agentes anti-infecciosos.
Bioprospecção de compostos do fungo Langermannia bicolor: potencial modulador de antibióticos, atividade antioxidante e avaliação de toxicidade
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-12-04) Moura, Geovanna Maria de Medeiros; Santos, Elizeu Antunes dos; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0003-4372-2161; http://lattes.cnpq.br/6762251930590306; https://orcid.org/0000-0002-3480-2218; http://lattes.cnpq.br/0915146393491834; Veras, Bruno Oliveira de; Oliveira, Maria Tatiana Alves; Santos, Paula Ivani Medeiros dos; Paiva, Weslley de Souza
A seleção e aumento da variedade de bactérias multirresistentes tem impulsionado a busca por novos agentes terapêuticos e adjuvantes. Neste estudo investigamos as propriedades de um extrato do cogumelo Langermannia bicolor como modulador de antibióticos (gentamicina, norfloxacina e ampicilina) contra linhagens multirresistentes de Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, bem como a sua ação antioxidante e sua toxicidade in vitro e in vivo. O extrato bruto aquoso de L. bicolor foi fracionado com volumes crescentes de acetona, resultando em três frações (F0.5, F1 e F2), que apresentaram diferentes perfis bioquímicos. Testes com eritrócitos humanos revelaram que o extrato e as frações não possuem ação hemolítica, enquanto os ensaios de redução de MTT em células fibroblásticas (NHI/3T3), apenas o extrato bruto reduziu a viabilidade em 50%. Em diferentes estágios de desenvolvimento de zebrafish (Danio rerio), os ensaios in vivo confirmaram a ausência de toxicidade das frações, através de análises em briotóxicas, batimentos cárdiacos e testes comportamentais. Embora nenhuma fração tenha demonstrado atividade antibacteriana direta, todas exibiram efeitos moduladores significativos quando combinadas com antibióticos convencionais nas bactérias multirresistentes testadas. Notavelmente, a fração F2, rica em proteínas, com maiores atividades proteolíticas e hemaglutinante, reduziu a Concentração Inibitória Mínima (CIM) da gentamicina em todas as linhagens testadas. As frações também foram potentes antioxidantes in vitro e in vivo. A fraçãoF0.5, rica em compostos fenólicos e flavonoides, exibiu o espectro mais amplo de atividades antioxidantes, incluindo quelação de metais (Fe+2 e Cu+2), sequestro de radicais livres (OH• e O2-•) e proteção celular, concomitante e preventiva, contra estresse oxidativo induzido por peróxido de hidrogênio (H2O2) em células 3T3. Já a fração F1, com predominância decarboidratos, após o estresse de H2O2, foi capaz de corrigir o dano oxidativo. In vivo, todas as frações protegeram os embriões de zebrafish expostos a H2O2.Na quantificação das espécies reativas de oxigênio (EROs) pela sonda fluorescente (DCFH), as larvas de zebrafish tratadas com a F0.5 e, em seguida, com H2O2 reduziram significativamente a produção de EROs em suas células, com valores menores, até, do que os das larvas não expostas ao agente oxidante. De forma menos expressiva, F1 e F2 também protegeram as células do zebrafish, reduzindo a produção de EROs. Ao explorar de forma pioneira o potencial terapêutico de L. bicolor, nosso estudo pavimenta o caminho para investigações futuras, mais aprofundadas, sobre a composição de bioativos desse cogumelo e seus respectivos mecanismos moleculares, envolvidos nas propriedades encontradas: potencialização de antibióticos e proteção contra o estresse oxidativo.
Bioquímica quântica de interações ligante-proteína entre entre potenciais agentes anti maláricos e as enzimas DHODH e TyrRS do Plasmodium falciparum
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-11-10) Costa, Aranthya Hevelly de Lima; Fulco, Umberto Laino; Oliveira, Jonas Ivan Nobre; https://orcid.org/0000-0003-1646-921X; http://lattes.cnpq.br/2461374517882321; https://orcid.org/0000-0002-4528-9878; http://lattes.cnpq.br/9579151361576173; https://orcid.org/0000-0003-0867-677X; http://lattes.cnpq.br/7800733727878164; Albuquerque, Eudenilson Lins de; Rachetti, Vanessa de Paula Soares; Bezerra, Eveline Matias; Costa, Roner Ferreira da
A malária é uma doença parasitária, originada de protozoários unicelulares que compõem o gênero Plasmodium, abrangendo mais de 90 países, sendo predominante nos continentes africano e asiático. O uso de medicamentos antimaláricos é crucial tanto para o tratamento quanto para a prevenção da doença. No entanto, os parasitos começaram a desenvolver resistência aos medicamentos antimaláricos, tornando mais difícil o combate do parasito. Como resultado, novas abordagens terapêuticas são necessárias para superar a resistência aos medicamentos nos parasitos e aumentar a eficácia da terapia medicamentosa contra a doença. O objetivo desta pesquisa é fornecer uma caracterização das inter-relações que interferem no comportamento dos complexos proteína-ligante de enzimas provenientes do Plasmodium falciparum. O primeiro estudo visa caracterizar a diidroorotato desidrogenase (DHODH), apresentando os valores energéticos da enzima nos complexos com a PfDHODH de tipo selvagem, com os ligantes DSM483, DSM557 e DSM1, e com PfDHODH com a mutação C276F, em conjunto com o DMS1. No segundo estudo, a pesquisa é realizada com a tirosina RNAt sintetase (TyrRS), sendo também estudada tanto na sua forma selvagem PfTyrRS, ligada ao ML901-Tyr e AMS-Tyr, quanto com a mutação S234C, novamente em complexo com o ML901-Tyr. Utilizando o método de fracionamento molecular com capas conjugadas (MFCC), os resíduos de aminoácidos foram particionados para calcular interações individuais com o formalismo DFT (Teoria da Densidade Funcional). O estudo com a enzima PfDHODH revelou que os resíduos de aminoácidos Arg265, Cys184 e Phe188 foram cruciais nas interações, e apresentaram energias de interação significativas com os quatro complexos estudados. Além disso, o valor energético do inibidor DSM1 não foi afetado pelas alterações estruturais causadas pela mutação C276F, demonstrando a sua capacidade de ligação à enzima. Já se tratando do trabalho envolvendo PfTyrRS, foram encontrados seis resíduos significativos compartilhados entre os três complexos. Esses resíduos incluem Asp61, Gln73, Gln192, Gln210, Met237 e Phe63, com a maioria deles desempenhando um papel essencial na ligação do ATP. Esta descoberta permite uma compreensão abrangente da interação entre as enzimas PfDHODH e PfTyrRS, juntamente com os seus inibidores. As informações coletadas neste estudo despontam como relevantes para o desenvolvimento de novas terapias medicamentosas, podendo vir a tornar-se um auxílio na exploração de design de novas drogas antimaláricas mais elaboradas e eficazes.
Blends de polissacarídeos sulfatados e picolinato de cromo: produção e avaliação de sua atividade antioxidante
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-11-30) Morais, Yara Campanelli de; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0003-2252-1221; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; http://lattes.cnpq.br/9254975868645972; Moura, Carlos Eduardo Bezerra de; Fidelis, Gabriel Pereira; Macedo, Marina de Oliveira Cardoso; Santos, Pablo de Castro; http://lattes.cnpq.br/6456286305129050
A alga vermelha Gracilaria birdiae (Gb) é cultivada e usada como alimento no Nordeste do Brasil e seu polissacarídeo sulfatado (agarana), aqui denominado de SPGb, é apontado contendo várias propriedades de interesse acadêmico, inclusive como agente antioxidante. Já o picolinato de cromo (ChrPic) é um composto bioinorgânico com capacidade anti-inflamatória descrita recentemente, sendo assim, teve-se como objetivo produzir blends contendo SPGb e ChrPic e avaliá-los como melhores agentes antioxidantes inicialmente, pois blends correspondem a associação de compostos cujo objetivo é melhorar sua atividade/eficiência, em relação aos produtores isolados. Em relação as propriedades atribuídas ao SPGb e ChrPic, não há registro de blends unindo os mesmos. O ChrPic foi adquirido comercialmente e o SPGb obtido da alga após técnica de extração através de exposição a ondas de ultrassom, meio básico e proteólise. A identificação do SPGb foi confirmada por análises químicas e de ressonância magnética nuclear (1H1D e HSQC). O ChrPic (de 0,5 a 2,0 mg/mL) não apresentou atividade quelante de cobre ou de ferro, já o SPGb (2,0 mg/mL) apresentou atividade de 70 e 73%, para esses testes, respectivamente. Por outro lado, ChrPic (1,0 mg/mL) apresentou cerca 80% e 100% de atividade de sequestro dos radicais superóxido e hidroxila, respectivamente, enquanto SPGb (2,0 mg/mL) não apresentou essa atividade. Foram produzidos 5 blends (B1; B2; B3; B4; B5) cuja atividade antioxidante foi avaliada e dados indicaram B5 como o blend mais potente agente antioxidante. Teste de micronúcleo (CBMN) demonstrou que B5 não possui atividade genotóxica, assim como, para citotoxicidade em fibroblastos murínico (3T3) e células de ovário de hamster chinês (CHO-K1), o B5 e o SPGb também não apresentaram atividades, o ChrPic (0,2 mg/mL) diminuiu em 30% a capacidade das células em reduzir o MTT, porém todas as amostras protegeram as células em mais de 70%. Quando células 3T3 foram expostas a peróxido de hidrogênio (H2O2) (0,6 mM) apresentaram cerca 50% da capacidade de reduzir o MTT em comparação com células não expostas ao peróxido, foram então testados três momentos diferentes de presença de H2O2, sendo o primeiro um reparador, quando as células foram incubadas com peróxido e posteriormente ficaram expostas a SPGb, ChrPic ou B5 por 24 horas. Nesse caso o SPGb não foi efetivo em proteger as células do peróxido, enquanto as células expostas a ChrPic (0,025; 0,05 e 0,1 mg/mL) e B5 (0,05 mg/mL) reduziram em 100% o MTT; já no segundo momento, o concomitante, quando as amostras foram colocadas nas células juntamente com o peróxido de hidrogênio e percebeu-se uma redução de menos de 30% do MTT na presença de SPGb, de até 55% na presença de ChPic e de 96% na presença de B5 (0,05 mg/mL). No terceiro momento, o preventivo, as células foram expostas ao SPGb, ChrPic ou B5 por 24 h, e posteriormente ao H2O2 (0,6 mM), verificou-se que a presença de SPGb foi incapaz de impedir a diminuição da capacidade das células em reduzir o MTT, enquanto as células expostas ao ChrPic e ao B5, em todas as concentrações, reduziram em 100% o MTT. Os dados demonstraram que B5 possui atividade antioxidante e possivelmente utilizado em teste futuros in vivo, para confirmar a sua ação antioxidante e assim indicá-lo como nutracêutico.
Caracterização do dietilditiocarbamato de sódio como um potencial fármaco na terapêutica da doença de Chagas
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-10-19) Oliveira, Johny Wysllas de Freitas; Silva, Marcelo de Sousa da; https://orcid.org/0000-0002-1000-0149; http://lattes.cnpq.br/1295430560645312; https://orcid.org/0000-0002-3100-0420; http://lattes.cnpq.br/9853996761260708; Ribeiro, Aline Rimoldi; Silva Júnior, Arnóbio Antônio da; https://orcid.org/0000-0002-7516-1787; http://lattes.cnpq.br/2593509584288129; Moreno, Claudia Jassica Gonçalves; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira
A doença de Chagas é uma zoonose endêmica na América Latina e afetam principalmente as populações mais pobres. Os medicamentos disponíveis para tratar ambas as doenças apresentam baixa efetividade frente as formas intracelulares, elevada toxicidade, baixa biodisponibilidade e acabam por não serem seguras a saúde dos pacientes. Portanto, a várias décadas busca-se avaliar a possibilidade na utilização de outros medicamentos frente a esta doença. Um promissor candidato é o dietilditiocarbamato de sódio (DETC) já descrito como sendo um composto de alta eficácia frente Leishmania sp. e ao Trypanosoma cruzi em modelos in vitro e in vivo, todavia, buscando melhorar sua biodisponibilidade e reduzir toxicidade foi avaliado neste trabalho emprego de um nanosistema e da molécula livre em uma abordagem in vitro, in silico e in vivo frente ao Trypanosoma cruzi. A nanopartícula foi nanoformulada por nanoprecipitação utilizando PLA como polímero e caracterizada nos parâmetros: físicoquímica, citotoxicidade, penetração celular e atividade antiparasitária, ao qual observou-se que o nanosistema após a nanoformulação PLA-DETC com base nas características físico-químicas mostrou-se estável, com tamanho médio < 200nm e com IPD <0,3 e potencial Zeta de -20 mV. Além disso, na avaliação da citotoxicidade demonstrou baixa toxicidade celular não provocando redução maiores do 20% da viabilidade celular, ademais destacou-se a capacidade de penetrar as células em um teste com as linhagens as células 3T3 e RAW em 24 horas e também chegou a inibir quase 70% da cepa Dm28c de T. cruzi em 24 horas. Ademais, induziu o aumento de espécies reativas de oxigênio no interior dos parasitas em quase 70%, sendo este um importante fator que pode levar o parasita a morte. Além disso, a partir de uma abordagem in sílico foi observado que o DETC apresenta um perfil ADMET mais adequado com base nas propriedades físico-químicas e químicas medicinais quando comparados com os fármacos tradicionalmente utilizados frente a doença de Chagas, o que indica uma menor toxicidade. Além disso, verificou-se a toxicidade in vivo tanto da nanopartícula de PLA-DETC, bem como o fármaco livre nas concentrações 300mg/kg e 1000mg/kg, ao qual avaliaram-se os perfis hematológicos, bioquímicos, histopatológicos e parâmetros físicos frente a caracterização da toxicidade aguda preconizada pela OECD no teste 423. A partir dos resultados foi observada pouquíssimas alterações em comparação com o grupo controle, primeiramente foi observada uma redução de 10% nos níveis de plaquetas, um aumento nos níveis de AST, com uma redução dos níveis de creatina, além disso, não houve alteração significativa no peso dos animais que seguiram o mesmo padrão que o grupo controle, bem como não foi observada mudança nos comportamentos dos animais. Por fim, foram avaliados protocolos de infecção e tratamento utilizando o DETC (300 mg/kg, 100 mg/kg, 0,36mg e 0,18 mg) e da nanopartícula de PLADETC (0,36mg e 0,18mg), ao qual observou-se redução significativamente estatística para o DETC que apresentou perfil similar ao benzonidazol na concentração de 100 mg/kg. Além disso, notou-se que durante o tratamento de 7 dias poucas alterações foram promovidas, resultando em uma baixa toxicidade do composto. Portanto, o DETC mostrou-se um potencial fármaco na terapêutica da doença de Chagas, todavia, ainda são necessárias mais validações, a seguir, frente a fase crônica da doença afim de fornecer mais dados deste composto promissor.
Desenvolvimento de blends contendo fucoidan A e avaliação da atividade antioxidante in vitro e in vivo em modelo Caenorhabditis elegans e zebrafish (Danio rerio)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-09-30) Silva, Cynthia Haynara Ferreira da; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0003-2252-1221; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; https://orcid.org/0000-0002-6764-5749; http://lattes.cnpq.br/7171255005743711; Gomes, Dayanne Lopes; Costa, Leandro Silva; Negreiros, Marília Medeiros Fernandes de; Ferreira, Éder Galinari
O estresse oxidativo é um processo fisiológico importante na regulação e manutenção de diversos processos básicos nos organismos e em doenças como as cardiovasculares, neurodegenerativas e câncer. Há um interesse crescente em identificar novas moléculas, principalmente de fontes naturais, que tenham propriedades antioxidantes. As macroalgas marinhas já se destacam como alimento funcional e como fonte de moléculas ativas com diversas propriedades, como os polissacarídeos sulfatados (PS). Um exemplo, é o PS fucoidan A (FucA), extraído da alga Spatoglossum schröederi que tem sido estudado pelo seu potencial antitrombótico, anti-inflamatório e antigenotóxica. Entretanto, FucA não demonstra uma atividade antioxidante significativa. A presença dessa propriedade antioxidante poderia potencializar os efeitos das atividades biológicas já identificadas. Uma estratégia de potencializar os efeitos de uma molécula é a modificação química pela adição de grupos funcionais e pela elaboração de blends que combinem as propriedades de dois componentes. Com o objetivo de potencializar a atividade antioxidante de FucA, utilizou-se uma ferramenta de planejamento fatorial e gráfico de superfície de respostas para elaborar blends contendo FucA e Dextrana modificada com ácido gálico (Dex-Gal). Análises químicas e estruturais confirmaram que Dex-Gal foi modificada com adição de 3% de AG e apresentou capacidade antioxidante total (CAT) 3,2 maior do que a Dex não modificada. Dex-Gal e FucA foram submetidas ao planejamento fatorial para combinação de diferentes proporções para desenvolver cinco blends (BLD1, BLD2, BLD3, BLD4 e BLD5). Dois blend, BLD1 e BLD5 apresentaram baixa atividade nos testes antioxidantes realizados. No teste CAT, três blends se destacaram: BLD4 (22 Eq. AA), BLD3 (17 Eq. AA), e BLD2 (13 Eq. AA). No teste de poder redutor, BLD4 se destacou com 28% de redução, contra 17% do BLD2 e 15% do BLD3. Notavelmente, BLD4 também se destacou no teste de sequestro de radical hidroxila com cerca de 100% de atividade. A análise dos gráficos de superfície confirmou que a proporção ideal do blend de FucA e de Dex-Gal é a formulada no BLD4, com 1:1 de cada componente. BLD4 foi selecionado para os testes antioxidantes em células da linhagem 3T3 e em modelo biológico Caenorhabditis elegans e zebrafish (Danio rerio). BLD4 não apresentou citotoxicidade em células 3T3 e protegeu preventivamente as células contra estresse oxidativo induzido por H2O2; protegeu as larvas de C. elegans aumentando a sobrevivência em estresse oxidativo com álcool terc-butil hidroperóxido (T-BOOH) e diminuiu em 30% a quantidade de espécies reativas de oxigênio intracelular; e, por fim, protegeu embriões de zebrafish contra estresse oxidativo por H2O2. Portanto, em célula e em modelo C. elegans, BLD4 apresentou melhor desempenho quando comparado com seus componentes de forma isolada.
Desenvolvimento de vacina multiepítopo e análise de potenciais inibidores da protease Mpro do Sars-CoV-2 via vacinologia reversa e bioquímica computacional
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-09-09) Campos, Daniel Melo de Oliveira; Oliveira, Jonas Ivan Nobre; Fulco, Umberto Laino; https://orcid.org/0000-0002-4528-9878; http://lattes.cnpq.br/9579151361576173; https://orcid.org/0000-0003-1646-921X; http://lattes.cnpq.br/2461374517882321; https://orcid.org/0000-0003-4016-3018; http://lattes.cnpq.br/9298368233770302; Rodrigues Neto, João Firmino; Vianna, Jéssica de Fátima; Bezerra, Katyanna Sales
As infecções causadas pelo SARS-CoV-2 representaram uma ameaça significativa à saúde pública global e continua sendo uma questão relevante e complexa. Esta tese teve como objetivo explorar novas abordagens para o combate ao vírus, focando no desenvolvimento de uma vacina multiepítopo e na identificação de potenciais inibidores da protease Mpro. Foram realizados dois estudos in silico: um dedicado ao design de uma vacina multiepítopo utilizando vacinologia reversa e outro voltado para o desenvolvimento de inibidores não covalentes por meio de química computacional. Além disso, a tese inclui uma revisão crítica sobre estratégias antivirais emergentes. Dessa forma, o primeiro capítulo desta tese apresenta uma revisão em forma de comentário sobre os alvos promissores e as estratégias farmacológicas adotadas durante o período pandêmico. Entre os principais alvos estavam a Mpro, a glicoproteína S e a TMPRSS2. Conclui-se que, apesar dos avanços, ainda eram necessárias evidências definitivas sobre a eficácia desses tratamentos. Enquanto isso, o reposicionamento de medicamentos existentes e o uso de plasma convalescente permaneciam como as melhores alternativas até que uma vacina eficaz fosse desenvolvida. No segundo capítulo, realizamos um estudo in sílico para o desenvolvimento de uma nova vacina multiepítopo contra SARS-CoV-2, incluindo as variantes Alfa, Beta, Gama, Delta e Omicron. Utilizamos uma abordagem imunoinformática para identificar os melhores epítopos imunogênicos das quatro proteínas estruturais do vírus (S, M, N e E) de 475 genomas sequenciados de regiões com alta incidência da doença. A vacina foi modelada, refinada, validada, e seu acoplamento molecular com o receptor TLR3 foi avaliado. Os resultados sugerem que a vacina candidata aumenta a resposta de anticorpos e deve ser testada em ensaios clínicos. No terceiro capítulo, avaliamos e comparamos dois potenciais inibidores não covalentes da Mpro do SARS-CoV-2, WU-04 e ML188, utilizando abordagens de química computacional, incluindo cálculos quânticos e análise ADMET. Nossos resultados revelaram que os resíduos Met165, Asn142, Glu166, His41 e Leu141 são críticos, pois interagem com alta afinidade com ambos os inibidores, sugerindo que esses resíduos são essenciais para a estabilização do complexo. A energia total calculada para o complexo Mpro-WU-04 foi de -52,21 kcal/mol, enquanto para o Mpro-ML188 foi de -40,47 kcal/mol, indicando que o inibidor WU-04 possui maior afinidade energética.
Desenvolvimento e avaliação de antídotos para envenenamento pela serpente Bothrops brazili: investigação do potencial antiofídico de ácidos fenólicos e obtenção de um sistema nanoparticulado de quitosana para produção de antissoros
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-06-22) Ferreira, Sarah de Sousa; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; https://orcid.org/0000-0002-3268-4270; http://lattes.cnpq.br/1772693537318693; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0003-2252-1221; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; Silva Júnior, Arnobio Antônio da; https://orcid.org/0000-0002-7516-1787; http://lattes.cnpq.br/2593509584288129; Salvador, Daniela Priscila Marchi; Queiroz, Giselle Pidde
O ofidismo causa elevada mortalidade e morbidade em muitas regiões do mundo. Atualmente, o principal tratamento é a soroterapia que apresenta algumas limitações, tais como: alto custo de produção, baixa eficácia na neutralização dos efeitos locais, dificuldade de acesso em algumas regiões e reações adversas. Considerando tais fatores, este estudo tem por objetivo geral apresentar novas alternativas para aprimorar o tratamento do ofidismo. Para este fim, foi utilizada a peçonha da serpente Bothrops brazili, espécie pouco estudada que é encontrada principalmente na região Amazônica. Deste modo, o presente estudo tem como objetivos específicos (1) analisar o potencial inibitório dos ácidos clorogênico e rosmarínico frente aos efeitos locais e sistêmicos induzidos pelo envenenamento por B. brazili, (2) obter e caracterizar nanopartículas de quitosana associadas a peçonha dessa espécie através de dois modos (incorporação e adsorção), a fim de serem avaliadas em relação ao potencial imunoadjuvante para a produção de um novo soro. A avaliação do potencial antiofídico dos ácidos clorogênico e rosmarínico foi realizada por meio de ensaios in vitro, in vivo e in silico. Nos ensaios in vitro, os ácidos foram capazes de inibir a atividade de proteases e fosfolipases da peçonha, além de reduzir o efeito pró-coagulante em plasma humano causado pela mesma. In vivo, esses compostos inibiram efeitos locais como edema, hemorragia, aumento da enzima mieloperoxidase e miotoxicidade. In sílico os ácidos mostraram ser capazes de interagir com fosfolipases da peçonha. Ademais, os ácidos mitigaram os efeitos sistêmicos decorrentes do envenenamento, que foram esses: danos renais, hepáticos, musculares, alterações hemostáticas (tempo de tromboplastina parcialmente ativada, tempo de protrombina e plaquetograma), hematológicas (eritrograma e leucograma) e peroxidação lipídica. As nanopartículas foram obtidas por gelificação iônica e apresentaram tamanho entre 150 a 190 nm, potencial de aproximadamente +30 mV e índice de polidispersão de aproximadamente 0,400. As nanopartículas apresentaram 97% de eficiência para incorporar e adsorver a peçonha e apresentam forma e tamanho homogêneos. A análise de espectroscopia da região do infravermelho por transformada de Fourier revelou que a peçonha apresentou bandas em 1543 cm-1 e 1651 cm-1 referentes a grupamentos amida. As nanopartículas apresentaram bandas em 916, 1087, 1259 e 1340 cm-1 que sofreram desvio após a incorporação e adsorção da peçonha. Em conclusão, estes resultados demostram que os ácidos clorogênico e rosmarínico apresentam potencial de inibição dos efeitos locais e sistêmicos induzidos pelo envenenamento por B. brazili, o que os tornam possíveis alternativas para a complementação da soroterapia. Adicionalmente, as nanopartículas de quitosana foram eficientes em incorporar e adsorver a peçonha apresentando grande potencial para serem utilizadas como adjuvante na produção de um novo soro antiofídico.
Efeitos da retirada de sacarose e de etanol sobre comportamentos relacionados à ansiedade e à depressão: investigação do papel da via das quinureninas
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-02-27) Albino, Maryelle de Cássia; Rachetti, Vanessa de Paula Soares; Ferreira, Frederico Rogério; http://lattes.cnpq.br/1524215726056886; https://orcid.org/0000-0001-6783-5430; http://lattes.cnpq.br/6589553518544930; Silva Júnior, Edilson Dantas da; Gavioli, Elaine Cristina; Fernandes, Isabella Maria de Oliveira Pontes; Zanoveli, Janaina Menezes
O uso repetido e prolongado de substâncias psicoativas provocam neuroadaptações que favorecem o desenvolvimento de tolerância, dependência química e sintomas de abstinência em tentativas de interrupção de consumo. Tais sintomas causam grande sofrimento psíquico e constituem-se fatores de reforço negativo do uso. A via das quinureninas é uma possível candidata à neuromodulação e à contribuição para as alterações emocionais comportamentais da retirada devido a indoleamina 2,3-dioxigenase (IDO), principal enzima da via, metabolizar grande parte do triptofano encefálico, interferindo na síntese de serotonina e gerar metabólitos neuroativos e reativos. Para analisar essa hipótese, este trabalho investigou os efeitos da retirada de sacarose e de etanol sobre comportamentos relacionados à ansiedade e à depressão, sobre a atividade da IDO e o perfil sorológico de ratas Wistar. Mulheres são mais vulneráveis ao desenvolvimento de transtornos emocionais e alimentares quando comparadas aos homens. Além disso, foi investigada a ação prebiótica da fibra alimentar inulina em ratas em exposição e retirada de etanol. É conhecido que o etanol causa prejuízos na microbiota e na permeabilidade intestinal levando a quadros inflamatórios que poderiam interferir na atividade neural e respostas emocionais. Portanto, na etapa experimental 1, as ratas foram submetidas à dieta líquida de sacarose por 16 dias e à retirada de sacarose a curto prazo (48h) ou a longo prazo (21 dias). Após, realizaram testes comportamentais do campo aberto (CA - 72h e dia 22º de abstinência) e natação forçada (NF - dia 4 e 5º, 23 e 24º de abstinência). Na etapa experimental 2, as fêmeas foram submetidas à dieta líquida exclusiva de etanol em concentração crescente (2, 4 e 6%) por 21 dias e a abstinência por 22 dias. Depois, passaram por testes comportamentais nos dias 22 (labirinto em cruz elevado - LCE), 23 (spray de sacarose - SS), 24 (marble burying - MB), 25 (pré-NF) e 26 (NF) dias de abstinência. O tratamento com inulina consistiu na administração de solução (100 mg/Kg ou 300 mg/Kg via oral, gavagem) a partir do 14º dia de exposição ao etanol até ao final dos testes comportamentais. Por fim, os animais foram eutanasiados para coleta de amostras de sangue, do córtex frontal, do estriado e do hipocampo. Nenhuma alteração comportamental foi vista nos animais em retirada de sacarose, porém as ratas expostas a sacarose de forma contínua reduziram a imobilidade no NF. Já as ratas em retirada de etanol exibiram menor exploração dos braços abertos no LCE, maior enterramento de bolas de vidro no MB e maior tempo de imobilidade no NF. Quando tratadas com inulina na dose de 100 ou 300 mg/Kg, as fêmeas em retirada etanólica apresentaram comportamento semelhante aos controles na exploração dos braços abertos do LCE. Ainda, as ratas em retirada e tratamento com inulina 300 mg/Kg apresentaram comportamento semelhante aos controles no enterramento de bolas de vidro e na imobilidade no NF. Não houve alteração no nível de quinureninas, marcadores de estresse oxidativo encefálicos e marcadores do perfil sorológico dos animais, com exceção dos expostos a sacarose que apresentaram aumento dos triglicerídeos plasmáticos. Em conclusão, o consumo prolongado de sacarose demonstrou um efeito antidepressivo. A retirada de etanol promoveu comportamentos do tipo ansiosos e depressivos que foram mitigados pelo tratamento com a inulina. O prebiótico inulina demonstrou um potencial candidato para o tratamento do transtorno por uso de álcool.
Os efeitos indiscriminados dos esteroides anabolizantes androgênicos no sistema cardiovascular e sua análise por bioquímica quântica
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-05-25) Nunes, Ana Camila Campelo de Albuquerque; Fulco, Umberto Laino; Oliveira, Jonas Ivan Nobre; https://orcid.org/0000-0003-1646-921X; http://lattes.cnpq.br/2461374517882321; https://orcid.org/0000-0002-4528-9878; http://lattes.cnpq.br/9579151361576173; http://lattes.cnpq.br/6105729519636277; Silva Júnior, Edilson Dantas da; Albuquerque, Eudenilson Lins de; Ribeiro Júnior, Luiz Antônio; Freire, Valder Nogueira
Os esteroides androgênicos anabolizantes (AAA), derivados naturais e sintéticos da testosterona, são substâncias com características tanto androgênica como anabólica, que são utilizados tanto de forma clínica como também por atletas por suas propriedades anabólicas. No entanto, se questiona os efeitos anabólicos da testosterona e seus derivados, pois o que se sabe é que eles são eficazes para aumentar o desempenho e melhorar a aparência física, mesmo tendo efeitos colaterais que podem impactar sobre a saúde e o bem-estar. Esta tese apresenta duas pesquisas realizadas, uma relacionada a uma revisão narrativa e a segunda no campo da simulação ab initio, baseadas em princípios da Mecânica Quântica. O primeiro estudo expõe uma revisão narrativa através de estudos experimentais apontando os principais efeitos dos esteroides anabólicos androgênicos no sistema cardiovascular. Os artigos utilizados para esta revisão foram publicados no período de 2010 a 2019 nas bases de dados Pubmed, Scielo e em periódicos independentes, após a triagem por título e resumo, 26 artigos foram selecionados. Os resultados desta revisão permitiram ratificar que o uso de esteroides anabolizantes pode causar alterações estruturais e funcionais da musculatura cardíaca decorrente ao seu uso, por efeitos diretos e/ou indiretos, podendo provocar e perpetuar doenças cardiovasculares. O segundo estudo caracteriza o sítio de ligação dos AAA Testosterona, DHT (Di-hidrotestosterona) e THG (Tetrahydrogestrinone) em complexo com o receptor androgênico identificando as interações químicas responsáveis pela manutenção da complementariedade fármaco-receptor e avalia as mudanças que ocorrem nessas interações, utilizando a estratégia MFCC à luz do DFT e parametrizações de constantes dielétricas. Nossos resultados confirmam a importância dos resíduos de aminoácidos Asn 705, Leu707, Leu704, Leu701, Leu873, Met742, Met780, Phe764, Met745 e Thr877 para o esteroide DHT. Quando analisamos o THG, os resíduos importantes foram Arg752, Asn705, Leu873, Leu707, Leu704, Met745, Met742 e Phe764. Já para o esteroide Testosterona os resultados confirmam a importância dos resíduos de aminoácidos Asn705, Gly708, Leu704, Leu701, Leu873, Met745, Met742 Met895, Met780, Phe764, Phe876, Thr877. O método computacional utilizado no segundo estudo emerge como uma alternativa eficiente para o desenvolvimento de medicamentos e podem auxiliar na descoberta e design de ligantes antiandrogênicos aprimorados.
Encapsulação de carotenoides: um estudo do efeito na atividade antioxidante e anti-inflamatória no tecido adiposo
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-10-27) Queiroz, Jaluza Luana Carvalho de; Morais, Ana Heloneida de Araújo; Passos, Thais Souza; https://orcid.org/0000-0003-2054-1544; http://lattes.cnpq.br/9685790797554876; https://orcid.org/0000-0002-6460-911X; http://lattes.cnpq.br/1233944493334651; https://orcid.org/0000-0001-5746-2722; http://lattes.cnpq.br/2164857110284780; Assis, Cristiane Fernandes de; https://orcid.org/0000-0001-7595-5395; http://lattes.cnpq.br/0034694007210837; Amado, Isabel Rodriguez; Finotelli, Priscilla Vanessa; Moura, Sérgio Adriane Bezerra de
Os carotenoides atuam reduzindo o estresse oxidativo e, por conseguinte, agem sobre o processo inflamatório. A encapsulação pode preservar e/ou potencializar as propriedades funcionais desses pigmentos naturais, tais como atividade antioxidante. No presente estudo, dividido em capítulos, buscou-se avaliar como a encapsulação atuou aprimorando a atividade antioxidante e anti-inflamatória de carotenoides. O primeiro e segundo capítulos, referentes à revisão sistemática (RS), estão organizados da seguinte forma: o primeiro apresenta o protocolo de RS com registro prospectivo internacional de revisões sistemáticas (PROSPERO, sob o número CRD42020142065); e o segundo a RS, a qual reuniu e sistematizou estudos in vitro, ex vivo, in vivo, que avaliaram o efeito das diferentes técnicas de encapsulação de carotenoides na atividade antioxidante. Os artigos foram selecionados de acordo com a estratégia PICOS (população, intervenções, controle, resultados e tipo de estudo) e as buscas foram realizadas nas bases de dados PubMed, Embase, Biblioteca Virtual em Saúde, Scopus, ScienceDirect e Web of Science. A avaliação da qualidade metodológica foi executada por meio da ferramenta OHAT (Office of Health Assessment and Translation). Foram selecionados 1577 artigos, resultando em 20 estudos elegíveis. Os resultados mostraram que a encapsulação promoveu mudanças na estrutura química dos carotenoides e o surgimento de novas interações químicas, além de aumentar a área superficial, resultando na preservação e no aprimoramento da atividade antioxidante. O terceiro capítulo refere-se ao estudo experimental, no qual se avaliou o efeito do extrato bruto rico em carotenoides obtido do melão Cantaloupe (Cucumis melo L. var cantalupensis) (EB) nanoencapsulado (EGS) em ratos Wistar com inflamação induzida pelo consumo da dieta de alto índice glicêmico e alta carga glicêmica (HGLI) sobre a resposta inflamatória sistêmica e do tecido adiposo. O EB foi caracterizado por métodos espectrofotométrico e cromatográfico, e o EGS foi caracterizado por métodos físicos e químicos, bem como avaliação da eficiência de incorporação. O experimento in vivo foi realizado por 11 dias com ratos Wistar machos (n = 20) com inflamação induzida por dieta, subdivididos em quatro grupos: sem tratamento (dieta HGLI + água), tratamento convencional (dieta HGLI + dieta nutricionalmente adequada), tratamento teste 1 [dieta HGLI e EB (12,5 mg/Kg)] e tratamento teste 2 [HGLI e EGS (50 mg/kg)]. Os grupos foram investigados em relação ao consumo alimentar, ingestão calórica, eficiência calórica e peso. As citocinas inflamatórias foram dosadas no plasma (TNF-α, IL-6 e leptina) e no tecido adiposo (TNF-α e IL-6). Além disso, foram registrados os pesos dos tecidos adiposo visceral (retroperitoneal, epididimal e perirrenal), realizadas análises histopatológicas e, investigação da atividade antioxidante no plasma e tecido adiposo visceral por meio da quantificação do malondialdeído, sulfidrilas e da atividade da superóxido dismutase (SOD). Para o experimento in vivo, não foram observadas alterações no consumo alimentar, ingestão, eficiência calórica e peso (p > 0,05). Porém, os animais tratados com EGS apresentaram menor variação média do consumo dietético e foi o único grupo que apresentou apenas perda de peso. Esse grupo também apresentou melhora (p < 0,05) nas concentrações plasmáticas das citocinas inflamatórias (IL-6 e leptina), contudo sem diferença na dosagem no tecido adiposo. No tecido adiposo visceral, constatou-se que a maior área focal de adipócitos multiloculares foi observada para o grupo tratado com EGS. Além disto, o EGS pode estar atuando de forma mimética a SOD e, com isso, reduzindo o estresse oxidativo. Dessa forma, o presente estudo apresenta uma contribuição científica relevante, pois a RS gerou informações relativas ao efeito da nanoencapsulação sobre a atividade antioxidante e, no estudo pré-clínico, sobre a inflamação.
Encapsulação de proteínas e peptídeos com propriedades antiobesidade: estudo do efeito do inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo sobre o peso e saciedade
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-05-30) Costa, Rafael Oliveira de Araújo; Morais, Ana Heloneida de Araújo; Passos, Thais Souza; https://orcid.org/0000-0003-2054-1544; http://lattes.cnpq.br/9685790797554876; https://orcid.org/0000-0002-6460-911X; http://lattes.cnpq.br/1233944493334651; https://orcid.org/0000-0001-6118-0680; http://lattes.cnpq.br/9512494982702459; Silva Júnior, Arnobio Antônio da; Gonçalves, Catarina; Finotelli, Priscilla Vanessa; Lima, Severina Carla Vieira Cunha
A obesidade impulsionaa busca por novas estratégias para combatê-la. Nesse sentido, vários peptídeos e proteínas com atividade sacietogênica têm sido alvos de estudos por agirem na regulação do consumo dietético e peso corporal. Dessa forma, esta tese divide-se em dois capítulos. No primeiro, buscou-se entender como peptídeos e proteínas, quando encapsuladas, atuavam sobre a saciedade, impactando no ganho de peso e no estado de obesidade. Para isso, foi realizada uma revisão integrativa por meio de busca em bases de dados, utilizando as palavras-chaves: peptídeo, proteína, obesidade, encapsulamento e agentes anti-obesidade e selecionando estudos pré-clínicos que comparavam o efeito de peptídeos ou proteínas, encapsulados ou não, sobre a saciedade. Foram selecionados 836 estudos, desses apenas quatro artigos atenderam os critérios de seleção. Embora tenha sido um número limitado de estudos, entre os efeitos observados com o encapsulamento dessas moléculas, destacaram-se a maior eficiência na redução do ganho de peso, alterações na função do tecido adiposo, além da redução dos níveis hormonais que modulam o apetite e o peso corporal, promovendo a potencialização dos efeitos desses peptídeos e proteínas quando encapsulados. No segundo capítulo, foi investigado o efeito do inibidor de tripsina isolado de sementes de tamarindo (ITT) comparado ao mesmo nanoencapsulado em quitosana e proteína isolada do soro do leite (EQPI). Dessa forma, o EQPI foi exposto a diferentes condições de pH (7.0; 3.0 e 7.0) e temperatura (37°C; 7°C e -18°C) visando avaliar a interação entre o ITT e os seus agentes encapsulantes monitorada pela atividade antitríptica. Posteriormente foi realizado o estudo pré-clínico, no qual ratos Wistar (n = 25), com obesidade induzida por dieta de alto índice glicêmico e alta carga glicêmica (HGLI) por 17 semanas, foram divididos em cinco grupos e avaliados por 10 dias, sendo eles: sem tratamento (HGLI + água), tratamento 1 (dieta nutricionalmente adequada), tratamento 2 (com dieta nutricionalmente adequada e EQPI/12,5 mg/kg), tratamento 3 (dieta HGLI e EQPI/12,5 mg/kg) e tratamento 4 (dieta HGLI e ITT/25 mg/kg). Esses grupos foram avaliados quanto ao consumo dietético, parâmetros zoométricos, bioquímicos e inflamatórios. O EQPI foi capaz de preservar eficientemente o ITT, não apresentando inibição para a tripsina, e quando submetido a condição ótima (agitação constante de 300 rpm, por aproximadamente 12 h, a 20°C) de liberação do ITT apresentou 100% de atividade antitríptica. Contudo, expondo EQPI aos diferentes pHs, apenas no pH gástrico durante 2 h observou-se expressiva atividade antitrípica. E quanto a exposição as temperaturas, EQPI apresentou alta atividade antitríptica, semelhante ao ITT (37°C por 4 h, 7°C por 3 dias e 7°C por 7 dias), demonstrando a liberação completa do ITT contido em EQPI. No estudo pré-clínico, ratos Wistar com obesidade tratados com EQPI reduziram significativamente a variação do peso corporal (p < 0,05) quando comparado ao tratamento com ITT. Observou-se que apenas o tratamento com ITT levou a mudanças significativas nos parâmetros inflamatórios (p < 0,05). O efeito do EQPI sobre o peso indica que a encapsulação promoveu aumento do efeito de ITT, com liberação sustentada. Portanto, a encapsulação de peptídeos e proteínas se mostra como uma estratégia promissora para aplicabilidade dessas moléculas no tratamento de doenças, como a obesidade.
Ensino híbrido gamificado de componentes curriculares de bioquímica com foco em sala de aula invertida
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-05-12) Souza Júnior, Airton Araújo de; Santos, Elizeu Antunes dos; https://orcid.org/0000-0003-4372-2161; http://lattes.cnpq.br/6762251930590306; http://lattes.cnpq.br/5983568041476035; Costa, Leandro Silva; Alves, Monique Gabriela das Chagas Faustino; Câmara, Rafael Barros Gomes da; https://orcid.org/0000-0001-5109-1991; http://lattes.cnpq.br/9200036511632745; Galembeck, Eduardo
Diante de uma realidade de ensino de bioquímica, que é permeada pelo adensamento dos conteúdos, complexidade interdisciplinar, e agravada por uma abordagem exclusiva ou excessivamente expositiva, torna-se cada vez mais necessário avaliar propostas metodológicas que mitiguem esse cenário. Assim, nesta tese o principal objetivo foi desenvolver uma proposta de trabalho de Ensino Híbrido Gamificado, baseado na Sala de Aula Invertida (SAI), em componente curricular de bioquímica, avaliando o desempenho acadêmico dos alunos, o interesse e engajamento dos alunos na disciplina, os elementos metodológicos da proposta, a gamificação e, por fim, os ganhos nas habilidades cognitivas, sociais e socioemocionais. Para tanto, foi realizada uma pesquisa de caráter exploratório, através do método de intervenção pedagógica, com uma abordagem qualitativa e quantitativa. A proposta foi aplicada em dois componentes curriculares de bioquímica da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN), para os cursos de Ciências Biológicas, nos períodos de 2016.2 e 2017.1, e de medicina, nos períodos de 2018 e 2019, ao todo 179 alunos participaram desse estudo. A pesquisa analisou os dados de dois designs de aula: a aulas tradicionais (expositivas convencionais) e aulas híbridas (AH), que foram divididas em momentos online e momentos presenciais, com objetivos que se combinavam nos dois momentos. Para os momentos online, foram utilizadas videoaulas e para os momentos presenciais foram aplicados objetos educacionais produzidos a partir da Taxonomia de Bloom. Todo o processo foi gamificado com um sistema de pontos (ranking), formação de times em uma lógica cooperativa e de conquistas de benefícios (sistema de recompensas). Os resultados mostraram que a maioria dos alunos teve um desempenho acadêmico melhor e declarou aumento do seu interesse pela disciplina, afirmando que a aprendizagem foi melhor nas aulas híbridas que nas aulas tradicionais. Ademais, a gamificação teve avaliação positiva e acabou promovendo o aumento do engajamento dos alunos. Além disso, observouse que o método contribui para a aprendizagem colaborativa e para a personalização da aprendizagem. Por fim, observou-se que a intervenção pedagógica contribui para o desenvolvimento de aspectos específicos para a disciplina de bioquímica, como, por exemplo, a compreensão de conceitos, das relações entre estrutura e função e a capacidade de propor soluções e argumentos para resolução de problemas, entre outros. Dessa forma, os resultados aqui descritos fornecem dados para uma discussão sobre a importância do modelo híbrido gamificado como alternativa promissora para os componentes curriculares de bioquímica. Certamente isso requer uma ampla reflexão sobre as abordagens e os processos envolvidos nesse modelo, isto porque estudos sobre a eficácia do Ensino Híbrido para o Ensino da Bioquímica ainda são muito escassos.

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