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Atividade antioxidante e neuroprotetora dos sucos de laranja Citrus sinensis L. Osbeck (Bahia e Cara Cara) no modelo Caenorhabditis elegans
(2019-06-21) Caland, Ricardo Basílio de Oliveira; Oliveira, Riva de Paula; ; ; Freitas, Renata Nascimento de; ; Ávila, Daiana Silva de; ; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de;
O suco de laranja Citrus sinensis L. Osbeck é considerado uma excelente fonte alimentar de vários compostos bioativos com propriedades benéficas para a saúde humana devido ao seu alto teor de flavonoides, carotenoides, açúcares, minerais e fibras. Alguns estudos epidemiológicos e de intervenção forneceram evidências para apoiar a correlação inversa entre o consumo de suco de laranja e a ocorrência de doenças cardiovasculares e câncer. Neste estudo, utilizamos duas variedades de laranjas, naturalmente enriquecidas, originadas através de mutação espontânea, denominadas Bahia e Cara Cara. Essas laranjas possuem alto teor de vitamina C e flavonoides, no entanto, a laranja Cara Cara se diferencia por também ser rica em carotenoides (fitoeno, fitoflueno, licopeno e βcaroteno). Considerando que o dano oxidativo e o aumento da neuroinflamação estão criticamente relacionados com a patogênese e a perda neuronal em doenças neurodegenerativas, o efeito neuroprotetor de alguns componentes da laranja tem sido de interesse específico na busca de tratamentos eficazes para essas doenças. Contudo, ainda existe carência de estudos in vivo para mostrar os efeitos terapêuticos do suco de laranja em sua forma integral e completa, tendo em vista que de forma isolada seus compostos já demostraram possuir efeitos antioxidantes e neuroprotetores positivos. Nesse contexto, utilizamos o nematodo Caenorhabditis elegans que é um organismo modelo amplamente estabelecido para estudos de comportamento, fisiologia e genética animal. Este trabalho teve com objetivo avaliar e comparar os efeitos antioxidantes, neuroprotetores e as alterações fisiológicas relacionadas ao envelhecimento do tratamento com os sucos de laranja pasteurizados Bahia e Cara Cara no modelo C. elegans. Para a realização dos experimentos, os animais foram sincronizados no estágio larval L1 e tratados a 20 ºC em placas de Petri com meio de crescimento sólido nematoide (NGM), com diferentes concentrações de suco de laranja Bahia ou Cara Cara, semeados com Escherichia coli OP50 ou E. coli HT115. O tratamento com os sucos de laranja proporcionou efeitos antioxidantes positivos no C. elegans como: redução nos níveis endógenos de espécies reativas de oxigênio (ERO), aumento da sobrevivência em condições padrão e de estresse oxidativo e aumento na expressão dos genes repórteres antioxidantes - glutamil cisteína sintetase (gcs-1), glutationa-S-transferase (gst-4) e superóxido dismutase (sod-3) e da chaperonina hsp-16.2. Em relação aos efeitos neuroprotetores, foi observado que o tratamento com laranja retarda o perfil de paralisia induzido pela super-expressão do peptídeo A𝛽1- 42 no músculo do modelo C. elegans para o Mal de Alzheimer e diminui a agregação poliglutamínica no modelo C. elegans para a doença de Huntington. Para investigar se as vias de sinalização de resposta ao estresse desempenhariam um papel importante nos efeitos dos sucos, foram realizados ensaios de quantificação de ERO, resistência ao estresse oxidativo, expressão de gst4::GFP, paralisia e longevidade em animais com knockdown para os fatores de transcrição SKN-1, DAF-16 e HSF-1 através de RNA de interferência (RNAi). Os resultados mostraram que os efeitos proporcionados pelo tratamento com os sucos de laranja Bahia e Cara Cara foram dependentes principalmente dos fatores de transcrição SKN-1 e DAF-16, com destaque para SKN-1. Em relação às alterações fisiológicas relacionadas ao envelhecimento, o tratamento aumentou o tempo de vida, os movimentos corporais e a taxa de batimentos faríngeos. Concluimos que os tratamentos com os sucos de laranja proporcionaram excelentes efeitos antioxidantes, neuroprotetores e ainda foram capazes de melhorar parâmetros fisiológicos relacionados ao envelhecimento, que estão fortemente envolvidos na qualidade de vida do C. elegans, com destaque para o suco de laranja Cara Cara que induziu respostas significativamente melhores, possivelmente devido ao maior teor de carotenoides.
Avaliação do consumo de leite em aspectos de saúde do consumidor e em modelo animal C. elegans
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-08-05) Oliveira, Ingrid Laíse Silvestre de; Rangel, Adriano Henrique do Nascimento; http://lattes.cnpq.br/9757343999118047; http://lattes.cnpq.br/4197537973286597; Oliveira, Riva de Paula; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; Ávila, Daiana Silva de; http://lattes.cnpq.br/4355211015887363; Fischer, Vivian; http://lattes.cnpq.br/9221640062810564
O estresse oxidativo é um desequilíbrio entre a produção e a desintoxicação de espécies reativas de oxigênio, o qual está associado ao desenvolvimento de doenças humanas. Visando alternativas intermediárias aos modelos experimentais que empregam animais vertebrados e os ensaios in vitro em cultura de células, os testes em Caenorhabditis elegans (C. elegans) são uma excelente opção. O C. elegans possui vias de sinalização que são altamente conservadas em humanos e são, portanto, úteis para estudar o estresse oxidativo. No primeiro capítulo, objetivou-se avaliar o efeito da exposição ao leite bovino no perfil redox do Caenorhabditis elegans. Foram utilizadas 04 amostras de leite devidamente pasteurizadas. O tratamento padrão para todos os ensaios foi por meio líquido (S basal/M9) com 20% leite. O efeito do tratamento foi testado no C. elegans em estágio L4, através dos ensaios de tamanho corporal, batimentos faríngeos, quantificação de progênie, resistência ao estresse oxidativo e quantificação de espécies reativas de oxigênio (EROs). O leite afetou o desenvolvimento, porém não houve interferência no número de batimentos faríngeos dos animais, nem causou alterações na capacidade de reprodução. O tratamento do C. elegans com 20% leite não parece aumentar a produção de EROs, porém diminuiu a sobrevivência em condições de estresse. Este estudo contribui para a caracterização dos efeitos da exposição ao leite no nematódeo C. elegans. O segundo capítulo, abrange o papel do consumidor na comercialização e aumento da disponibilidade de produtos provenientes de leite A2 (leite que contém apenas o alelo A2 para beta-caseína), o qual se faz de extrema importância para ditar a demanda e distribuição nacional do produto. Tem como objetivo, realizar um levantamento quanto ao conhecimento, consumo e mercado do leite e seus derivados pela população, com ênfase no leite A2. Questionários on-line através da plataforma “Google Formulários”, com caráter exploratório e descritivo foram aplicados para obtenção de respostas relacionadas ao conhecimento e consumo do leite A2. A pesquisa evidencia as preferências e interesses do consumidor acerca do leite A2, obtendo-se recurso-chave para inserção de um produto cada vez mais acessível e disponível, chamando atenção para os produtores de leite para seleção genética do rebanho de vacas A2A2.
Avaliação do efeito da inibição química das funções redox e reparo de APE1/Ref-1 sobre a transcrição gênica durante a inflamação
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2020-04-14) Oliveira, Thais Teixeira; Lima, Lucymara Fassarella Agnez; Oliveira, Riva de Paula; Pinto, Nadja Cristhina de Souza
A proteína APE1/Ref-1 possui dois domínios funcionais em mamíferos. O domínio N-terminal é capaz de reduzir fatores de transcrição, tais como NF-kB, AP-1 e HIF-1, aumentando a capacidades destes de ligação ao DNA e a expressão de seus genes alvos. Já o domínio C-terminal é responsável pela atividade de endonuclease de APE1/Ref-1, que atua no reparo de sítios apurínicos/apirimidínicos (AP) durante a via BER. Devido a suas várias funções, APE1/Ref-1 é um potencial alvo terapêutico estudado principalmente em relação ao câncer. Recentemente, foi demonstrado que a presença de 8-oxoG, principal lesão oxidada no DNA, nos promotores de alguns genes pode resultar na indução da expressão gênica na presença de OGG1 e APE1/Ref-1. Sendo assim, APE1/Ref-1 também regula a expressão gênica de maneira dependente da sua função de reparo. Porém, o papel de cada uma das funções de APE1/Ref-1 sobre a regulação transcricional ainda não está completamente elucidado. Em um trabalho anterior do nosso grupo, foi observado através de RNAseq, que a inibição da atividade de endonuclease de APE1/Ref-1 por metoxiamina altera a expressão de diversos genes durante a inflamação assim como diminui a expressão de citocinas e quimiocinas em monócitos pré-tratados com LPS. Dessa forma, o objetivo desta pesquisa foi verificar quais outros genes têm sua expressão afetada pela inibição do reparo de sítios AP, assim como identificar através de ferramentas de bioinformática os possíveis reguladores e parceiros de APE1/Ref-1 nesta resposta. Para isso, o RNA-seq foi reanalisado utilizando ferramentas de bioinformática e bancos de dados atualizados. Adicionalmente, os genes diferencialmente expressos após o tratamento com metoxiamina foram analisados quanto às suas funções e aos possíveis reguladores de sua expressão. A análise do transcriptoma indicou que o tratamento com metoxiamina aumenta a expressão de genes relacionados à inibição da via mTORC1 e a poliubiquitinação de proteínas. Por outro lado, diminui a expressão de genes relacionados a progressão do ciclo celular, transcrição, expressão de genes mitocondriais, produção de prostaglandinas e sinalização via Toll-like independente de MyD88. Além disso, esses genes foram comparados com aqueles diferencialmente expressos após o tratamento com E3330 (inibidor específico da função redox) nas mesmas condições. Os principais reguladores dos genes comuns assim com seus alvos foram analisados quanto a sua expressão por meio de q-PCR e Western blot. Foi observado que tanto a função de reparo de APE1/Ref-1 quanto a função redox são capazes de diminuir a transcrição de genes alvos de NRF1, GABPA e ELK1. Esses genes estão relacionados à biogênese mitocondrial, processamento de rRNA e biogênese ribossomal. Além disso, foi observado que ambas as funções de APE1/Ref-1 diminuem de maneira semelhante a expressão de genes relacionados a biogênese mitocondrial, assim como também são capazes de diminuir a expressão de Myc. Por outro lado, a expressão de proteínas ribossomais foi principalmente afetada por E3330, enquanto a inibição do reparo de DNA foi capaz de diminuir a expressão do pré-rRNA 47S sem afetar o processamento deste RNA. Por fim, podemos concluir que ambas as funções de APE1/Ref-1 podem estar envolvidas na regulação de genes relacionados a biogênese mitocondrial, mas exercem papeis diferentes na regulação de genes relacionados ao processamento e transcrição do rRNA.
Caracterização das proteínas EXO-3/APE1 e XPA-1/XPA no desenvolvimento de fenótipos neurodegenerativos no Caenorhabditis elegans
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2025-02-24) Bezerra, Liliane Soares de Castro; Oliveira, Riva de Paula; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0002-6092-6142; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; http://lattes.cnpq.br/4789315674848468; Campos, Julliane Tamara Araújo de Melo; Souza, Evandro Araújo de
Evidências clínicas indicam que as deficiências nas vias de reparo por excisão de nucleotídeos (NER) e excisão de bases (BER) estão associadas a patologias neurodegenerativas em humanos, sugerindo que que essas vias desempenham um papel fundamental nas Doenças Neurodegenerativas crônicas. A falha na via NER resulta em diversos danos ao DNA, como ativação contínua da poli-ADP-ribose polimerase 1 (PARP1) e diminuição do NAD+ intracelular. Contudo, a relação entre a disfunção mitocondrial e a deficiência da via BER ainda não é completamente compreendida, assim como a possível interação com a via NER. O nematódeo Caenorhabditis elegans é um modelo amplamente utilizado para investigar doenças neurodegenerativas em organismos multicelulares em desenvolvimento. As vias BER e NER são bem preservadas em C. elegans. Nesse organismo, a endonuclease EXO-3, homóloga à APE1 da via BER, e o ortólogo XPA-1 da via NER desempenham papéis chave. Mutantes exo-3 apresentam redução na progênie, aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e maiores deleções de DNA mitocondrial (mtDNA). Já os mutantes xpa-1 são sensíveis à radiação UV e apresentam deficiências no sistema ubiquitina-proteassoma (UPS) e no metabolismo mitocondrial. Assim, avaliou-se como as deficiências de EXO-3 e XPA-1 influenciam a integridade mitocondrial e o desenvolvimento de fenótipos neurodegenerativos em modelos transgênicos de C. elegans. Para isso, foram analisados animais knockdown para exo-3 e/ou xpa-1 de cepas que emitem GFP em mitocôndrias intestinais e musculares, além de também ter sido observado o efeito da deficiência das vias BER e NER na apoptose, também foi avaliado a integridade neuronal colinérgica em animais deficientes para exo-3 ou xpa-1. Os resultados indicaram evidências de neurodegeneração e indícios de disfunção mitocondrial em animais deficientes nas duas vias de reparo, reforçando a sobreposição dessas daus vias. Além disso, eles vão ao encontro do observado em estudos anteriores sobre aumento do conteúdo mitocondrial em animais knockdown para exo-3;xpa-1. Dessa maneira o foco volta-se no desenvolvimento de animais mutantes de deleção em exo-3 e xpa-1 para uma melhor caracterização da função mitocondrial e integridade neuronal. Espera-se que esse trabalho contribua para uma melhor compreensão das doenças neurodegenerativas e do papel da EXO-3, uma endonuclease central no reparo BER, no surgimento de fenótipos neurodegenerativos e sua associação com disfunções mitocondriais.
Caracterização dos mecanismos subjacentes da ação neuroprotetora do extrato de guaraná (Paullinia cupana) no organismo modelo Caenorhabditis elegans
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2018-11-26) Silva, Giovanna Melo Martins; Oliveira, Riva de Paula; Uchoa, Adriana Ferreira; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de
Pesquisas envolvendo o extrato das sementes de guaraná (Paullinia cupana) evidenciaram diversas propriedades biológicas benéficas, desde antioxidantes e antimutagênicas, até protetoras e estimulantes sobre o Sistema Nervoso Central (SNC). Resultados preliminares mostraram que o extrato de guaraná melhora o perfil de paralisia induzido pela super expressão do peptídeo β-amiloide no Caenorhabditis elegans, além de ser capaz de reduzir a neurotoxicidade da proteína Huntingtina (Q150), ter efeito antioxidante através da redução de EROs em animais expressando o peptídeo βA e até aumentar a atividade do proteassoma. No presente estudo, o nematódeo C. elegans foi utilizado como organismo modelo para aprofundar melhor os mecanismos envolvidos na ação neuroprotetora do extrato hidroalcoólico de guaraná (EHG). O tratamento com EHG não aumentou a taxa de sobrevivência dos animais tratados em condições de estresse oxidativo induzido por terc-butil hidroperóxido (t-BOOH), entretanto, foi capaz de aumentar o tempo de vida médio e máximo, o número de batimentos faríngeos e a motilidade em condições normais, sem alterar a taxa de reprodução. Através da contagem de pontos focais de fluorescência na linhagem transgênica LGG-1::GFP, o tratamento com EHG demonstrou capacidade de aumentar a atividade lisossômica. A dependência do mecanismo de ação do EHG quanto aos fatores de transcrição SKN-1, DAF-16 e HSF-1 foi analisada através da linhagem transgênica CL2006 unc-54/peptídeo βA1-42 humano (modelo para a doença de Alzheimer) e a tecnologia do RNA de interferência (RNAi) veiculado pela bactéria E. coli transgênica HT115 (PL440). O efeito protetor do guaraná se mostrou parcialmente dependente dos fatores de transcrição SKN-1 e DAF-16, mas não do fator HSF-1. Em conclusão, o guaraná tem o potencial de ativar vias de resposta ao estresse e processos envolvidos na homeostase proteica, apresentando-se como opção de tratamento e prevenção para doenças neurodegenerativas.
Comparação do efeito da deficiência dos genes csb-1, xpa-1 e xpc-1 sobre a integridade dos neurônios colinérgicos no Caenorhabditis elegans
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-08-08) Viana, Aian dos Santos; Oliveira, Riva de Paula; https://orcid.org/0000-0002-6092-6142; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; http://lattes.cnpq.br/5466088260430437; Campos, Julliane Tamara Araujo de Melo; https://orcid.org/0000-0002-8501-5521; http://lattes.cnpq.br/3504274193684794; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de; https://orcid.org/0000-0003-2431-0479; http://lattes.cnpq.br/5882662534904226
Danos volumosos ao DNA, principalmente os causados por UV, são reparados pela via de reparo por excisão de nucleotídeo (NER). A via NER é dividida em duas sub-vias, a GG-NER, relacionado a correção de danos no genoma e a TC-NER, responsável por corrigir erros encontrados durante a replicação do DNA. Efeitos da função destas vias acarretam uma série de doenças como xeroderma pigmentosum e síndrome de cockaine que apresentam alguns fenótipos neurológicos e neurodegenerativos. Estudos recentes apontam que a deficiência de NER causa disfunção da mitocôndrial relacionada à manifestação do fenótipo neurodegenerativo. Apesar de já ser conhecido o envolvimento de XPA e CSB no processo de neurodegeneração, a contribuição de forma comparada entre estes genes na integridade das projeções colinérgicas ainda não foi profundamente estudada. Este estudo pretende realizar a comparação do efeito neurodegenerativo da inibição da função dos genes csb-1, xpc-1 e xpa-1 no organismo modelo Caenorhabditis elegans, com 1 e 5 dias de vida adulta. Em C. elegans, apenas a via TC-NER está ativa em células somáticas, uma vez estes animais não realizam divisão mitótica após a idade adulta, Logo é provavelmente a mais importante no reparo de DNA. O knockdown dos genes csb-1, xpc-1 e xpa-1 foi realizado através RNA interferente (RNAi) usando sistema de bactérias modificadas contendo o DNA plasmidial capaz de sintetizar o RNA dupla fita (dsRNA) na cepa LX929 (unc-17::GFP) que carrega o gene da proteína fluorescente verde (GFP) sob controle transcricional do promotor unc-17 reconhecido apenas nos neurônios colinérgicos. A neurodegeneração foi analisada através da quantificação da intensidade de fluorescência e da integridade das projeções axonais dos neurônios. Não foi observada diferença estatística da intensidade de fluorescência relativa dos grupos analisados, porém, notou-se a presença elevada de estruturas em formas de nodos ao longo das projeções colinérgicas dos animais. Além disso, animais tratados com csb-1(RNAi) e xpc-1(RNAi) apresentaram apenas após 1 dia de tratamento. Não foi observado perda neuronal nos animais tratados após 1 e 5 dias de tratamento, o que pode indicar que o processo neurodegenerativo não decorre de perda neuronal nos primeiros 5 dias de tratamento. Apesar da ausência de perda de massa neuronal, o acúmulo de nodos nas projeções colinérgicas abre portas para estudos de novas formas de neurodegeneração associadas a inibição de csb-1, xpa-1 e xpc-1.
Contribuição das vias de reparo por excisão de bases e nucleotídeos no desenvolvimento de fenótipos neurodegenerativos nos modelos transgênicos de Caenorhabditis elegans
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-01-19) Cadavid, César Orlando Muñoz; Oliveira, Riva de Paula; ; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; ; http://lattes.cnpq.br/6780157967882819; Campos, Julliane Tamara Araújo de Melo; ; http://lattes.cnpq.br/3504274193684794; Medeiros, Silvia Regina Batistuzzo de; ; http://lattes.cnpq.br/5882662534904226; Cunha, Fernanda Marques da; ; http://lattes.cnpq.br/4457893486819547; Machado, Carlos Renato; ; http://lattes.cnpq.br/6306925202374274
As doenças neurodegenerativas (DN) são caracterizadas por uma perda neuronal progressiva que leva ao comprometimento motor ou cognitivo. Embora ainda não sejam completamente compreendidas, as DN compartilham muitos mecanismos moleculares, como: estresse oxidativo, agregação de proteínas, deficiência do sistema ubiquitina-proteassoma-autofagia, disfunção mitocondrial, bioenergética prejudicada, disfunção de neurotrofinas e processos neuroinflamatórios. As observações clínicas de que as deficiências nas vias de reparo por excisão de nucleotídeos (NER) e reparo por excisão de base (BER) causam patologias humanas associadas a sintomas neurológicos sugerem que NER e BER também podem desempenhar um papel crítico em DNs crônicas. Neste estudo, avaliamos a deficiência das vias de BER e NER, especialmente EXO-3 e XPA-1, respectivamente, no desenvolvimento de fenótipos neurodegenerativos em Caenorhabditis elegans. A inibição de EXO-3 e XPA-1 afetou o status redox aumentando os níveis de ERO e regulando positivamente a expressão de genes relacionados à resistência ao estresse de uma maneira dependente de SKN-1. Resultados semelhantes foram encontrados quando as proteínas APN1, XPC1 e CSB1 foram avaliadas. A deficiência de EXO-3 e XPA-1 também ativou o retículo endoplasmático e a resposta da proteína não dobrada mitocondrial (UPR) e interferiu na proteostase, conforme indicado pela atividade reduzida do proteassoma e expressão das subunidades do proteassoma. Essas alterações foram associadas à neurodegeneração de neurônios marcados com pan e colinérgico. A neurodegeneração induzida pela deficiência de EXO-3 e XPA-1 parece ser desencadeada pela hiperativação do sensor de danos ao DNA PARP1, uma vez que este fenótipo é resgatado pela inibição de PARP-1. A inibição dos genes apn-1, xpc-1 e csb-1 nos animais transgênicos para Mal de Alzheimer e Doença de Hungtinton acelerou os fenótipos neurodegenerativos, sendo o efeito mais marcado nos animais tratados com csb-1(RNAi). Juntos, esses resultados suportam um modelo em que a deficiência das vias BER e NER desempenha um papel ativo, gerando uma rede de sinais de estresse suficientemente forte para desencadear a neurodegeneração.
Design e síntese de derivados da retronecina e avaliação da atividade in vivo no modelo de Caenorhabditis elegans para a doença de alzheimer
(2018-02-27) Almeida, Wamberto Alristenio Moreira; Giordani, Raquel Brandt; Oliveira, Riva de Paula; ; ; ; Moreira, Susana Margarida Gomes; ; Souza, Marcus Vinícius Nora de;
A doença de Alzheimer (DA) é uma patologia neurodegenerativa multifatorial e a forma mais comum de demência no idoso em todo o mundo. As principais características patológicas da DA incluem placas beta-amiloides (βA), emaranhados neurofibrilares provenientes da hiperfosforilação da proteína tau, declínio da função colinérgica, estresse oxidativo e inflamação. O peptídeo βA é o alvo mais estudado, pois o surgimento das placas senis desencadeia os demais processos, ou atua por feedback nestes. O tratamento atual da DA é baseado em inibidores da enzima acetilcolinesterase e na memantina, um antagonista dos receptores N-metil-D-Aspartato, contudo os tratamentos são paliativos, uma vez que não interrompem o curso natural da doença, por essa razão as novas abordagens são baseadas em fármacos multialvos. Dentre os produtos naturais os alcaloides são os que mais se destacam como fonte de novos fármacos, inclusive, os anticolinesterásicos utilizados no tratamento da DA são alcaloides ou derivados semi-sintéticos destes. O objetivo deste estudo é desenvolver novas moléculas a partir da condensação do núcleo alcaloídico pirrolizidínico a Laminoácidos (fenilalanina e triptofano) e avaliar a atividade destas no modelo de Caenorhabditis elegans para a DA, isto porque um screening virtual de aminoácidos condensados a retronecina (RTN) foi realizado, e as moléculas apresentaram afinidade pela enzima acetilcolinesterase (AChE). A monocrotalina (MCT), molécula de partida para a síntese dos derivados, foi isolada a partir das sementes de Crotalaria retusa por meio de maceração em metanol seguida de extração ácido-base, posteriormente a mesma foi hidrolisada com hidróxido de bário e o núcleo pirrolizidínico, a RTN, foi obtida por isolamento em coluna de alumina básica. A RTN foi halogenada no carbono nove através de reação com cloreto de tionila, afim de favorecer reações de substituição nucleofílica nesta posição. Diversas propostas reacionais foram efetuadas objetivando condensar os Laminoácidos ao núcleo pirrolizidínicos. Os ensaios biológicos in vivo foram realizados no modelo já bem estabelecido para a DA a cepa CL2006 de Caenorhabditis elegans, um nematoide que expressa o peptído β-amiloide (βA) humano no músculo de forma constitutiva, que o leva a uma paralisia progressiva, as moléculas foram testadas em 3 concentrações 10, 50 e 100 μmol. Os animais foram sincronizados pelo método de NaClO e no quarto dia foram submetidos a temperatura de 35 ºC, que acelera o fenótipo de paralisia. Os vermes foram analisados a cada hora através do toque com a alça de platina, e aqueles que não moviam a região posterior do corpo eram quantificados como paralisados. Como padrão utilizou-se a memantina, que é o fármaco de escolha para os quadros avançados da DA. A memantina prolongou o tempo de paralisia no animal, o que corrobora com a literatura. A RTN na concentração de 100 µmol reduziu levemente a paralisia nos animais, enquanto que a retronecina clorada (RTNCl) não prolongou o tempo de paralisia nos animais, contudo não foi tóxica a estes mesmo em concentrações de 100 mmol. Os resultados mostram que a RTN e a RTNCl não são tóxicas como seu produto de partida, a MCT, o que é um indicativo que as modificações moleculares podem ser úteis para redução da toxicidade e ampliar os campos de atividade biológica para alcaloides pirrolizidínicos. A partir dos espectros dos produtos reacionais, estruturas foram propostas para os produtos obtidos.
O efeito antioxidante e hipolipidêmico dos sucos de diferentes cultivares de laranja (Citrus sinensis) no organismo modelo Caenorhabditis elegans
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-12-13) Bezerra, Liliane Soares de Castro; Oliveira, Riva de Paula; https://orcid.org/0000-0002-6092-6142; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; http://lattes.cnpq.br/4789315674848468; Scortecci, Katia Castanho; https://orcid.org/0000-0002-4690-2785; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; Morais, Ana Heloneida de Araújo; https://orcid.org/0000-0002-6460-911X; http://lattes.cnpq.br/1233944493334651
A obesidade é um distúrbio relacionado com o acúmulo excessivo de gordura corporal e se enquadra como fator de risco para o desenvolvimento de múltiplas enfermidades, como doenças cardiovasculares, diabetes mellitus tipo II, alguns tipos de câncer, entre outros. Devido a essa problemática, a busca por alternativas que possam minimizar os efeitos dessa condição é imprescindível, existem diversos tratamentos utilizados para esse fim, um deles é o por meio do consumo de alimentos naturais que possuem propriedades benéficas à saúde. O suco de laranja (Citrus sinensis) é uma forte candidata, visto que possui grande variedade de fitoquímicos comprovadamente capazes de diminuir o acúmulo de gordura e o estresse oxidativo causado pela obesidade. Existem diversos cultivares de laranjas, no presente estudo foi dada ênfase aos cultivares ‘Bahia’, ‘Cara cara’, ‘Moro’ e ‘Pêra’ e para investigar seus efeitos antiobesidade primeiramente traçou-se o perfil fitoquímico desses cultivares por meio de revisão bibliográfica, e observou-se a maior presença de carotenóides, como o betacaroteno e a criptoxantina nos sucos das laranjas cara cara (SLCC) e bahia (SLB), de flavonóides como a hesperidina no suco da laranja pêra (SLP), e de antocianinas exclusivamente no suco da laranja moro (SLM). Também foram avaliados os efeitos hipolipidêmicos e antioxidantes dos sucos dos cultivares supracitados utilizando o modelo animal Caenorhabditis elegans mediante quantificação de triglicerídeos, lipídios e espécies reativas de oxigênio (ERO) em condições padrões e em condição de obesidade induzida. Contudo, não foi possível estabelecer um padrão de resultados com os experimentos, não gerando nenhuma significância estatística entre eles, além disso, o modelo de obesidade induzida não foi efetivado com sucesso, entre as hipóteses para justificar o que houve nessas situações estão o viés de quantificação de proteína utilizado para padronizar as quantificações de triglicerídeos e ERO, a integridade nutricional dos sucos que pode ter sido alterada por questões de armazenamento, a quantidade insuficiente de glicose utilizada para indução de obesidade nos animais e contaminação persistente nos meios de cultura dos animais usados nos experimentos. Portanto, os resultados não saíram como esperados tendo em vista a literatura analisada durante a elaboração do projeto.
Efeito da dexametasona incorporada a nanopartículas poliméricas de poli (ácido lático-co-glicólico) (PLGA) na mucosite oral experimental
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2020-12-01) Ribeiro, Susana Barbosa; Medeiros, Caroline Addison Carvalho Xavier de; ; http://lattes.cnpq.br/2982271986555450; ; http://lattes.cnpq.br/6144871780056915; Maciel, Maria Aparecida Medeiros; ; http://lattes.cnpq.br/5360188002708095; Oliveira, Riva de Paula; ; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; Figueiredo, Jozi Godoy; ; http://lattes.cnpq.br/9995009111225694; Leitão, Renata Ferreira de Carvalho; ; http://lattes.cnpq.br/5213035069793195
A mucosite oral (MO) é uma reação adversa frequente e limitante da terapia de combate ao câncer, caracterizada por intensa reação inflamatória e formação cumulativa de úlceras na cavidade oral. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da dexametasona (DEX) incorporada em nanopartícula (NP) polimérica do poli (ácido lático-co-glicólico) - PGLA - no modelo experimental de mucosite oral induzida por 5-fluorouracil (5-FU) em hamsters Golden syrian. A incorporação da DEX ao PLGA foi realizada pela técnica da emulsificação evaporação do solvente, seguida por caracterização com determinação do potencial zeta, índice de polidispersibilidade, tamanho de partículas, microscopia de força atômica, estudo de estabilidade, determinação da eficiência de encapsulação e estudo de liberação in vitro. Para induzir o modelo de MO, o 5-FU foi administrado por via intraperitoneal (i.p.) no 1º (60mg/kg) e 2º (40mg/kg) dias do experimento, com subsequentes escoriações na mucosa oral realizada no 4º dia, sob efeito anestésico. Os animais foram distribuídos nos grupos experimentais: Normal, Trauma Mecânico, 5-FU, DEX (0,25; 0,5 ou 1mg/kg) e NP PLGA-DEX (0,1; 0,5 ou 1mg/kg). No 11º dia do modelo experimental, os animais foram eutanasiados. Foram realizadas as análises macroscópica, histopatológica, quantificação de IL-1β e TNF-α por ELISA, imunohistoquímica para os marcadores MMP-2, COX-2, TGF-β e NF-κB p65, MIF, imunofluorescência para NF-κB p65, SMAD 2/3 e p-SMAD 2/3, ensaio de qRT-PCR para determinar a expressão gênica de GILZ, MKP1, NF-κB p65 e AKT. A dexametasona 1mg/kg e NP PLGA-DEX 0,1mg/kg demonstraram efeitos anti-inflamatórios no modelo de MO experimental, apresentando redução significativa dos escores macroscópicos e histopatológicos (*p<0,05). O tratamento com DEX ou com NP PLGA-DEX atenuou os níveis das citocinas pró-inflamatórias TNF-α e IL-1β (*p<0,05), reduziu a imunomarcação para MMP-2, COX-2, TGF-β e NF-κB p65 (*p<0,05), suprimiu a expressão proteica de MIF, NF-κB p65, SMAD 2/3 e p-SMAD 2/3 (*p<0,05), inibiu a expressão gênica para NF-κB p65 e AKT, e elevou o mRNA para GILZ e MKP1 (*p<0,05), comparada aos animais com MO não tratados (grupo 5-FU). A DEX 1mg/kg e a formulação NP PLGA-DEX 0,1mg/kg reduziram a inflamação no modelo de MO induzida por 5-FU. A NP de PLGA otimizou o efeito da DEX, uma vez que apresentou eficácia com dose reduzida do glicocorticoide.
Efeitos tóxicos do reteno em Caenorhabditis elegans: indução de estresse oxidativo, disfunção mitocondrial e neurodegeneração
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2025-07-03) Alves, Maria Luiza Gregório; Oliveira, Riva de Paula; https://orcid.org/0000-0002-6092-6142; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; https://lattes.cnpq.br/3427422774632777; Amaral, Viviane Souza do; https://orcid.org/0000-0002-9326-9054; http://lattes.cnpq.br/4440806451383783; Luchiari, Ana Carolina; http://lattes.cnpq.br/7859231596449028
Este estudo investigou os efeitos tóxicos do reteno, um hidrocarboneto policíclico aromático (HPA) não prioritário, utilizando Caenorhabditis elegans como modelo experimental. HPAs são compostos orgânicos amplamente distribuídos no ambiente, gerados principalmente pela queima incompleta de matéria orgânica e combustíveis fósseis. Como poluentes persistentes, estão associados à contaminação do solo, da água e do ar, representando um importante problema de saúde pública e ambiental devido ao seu potencial carcinogênico, mutagênico e tóxico para diversos organismos. A exposição ao composto comprometeu diferentes aspectos fisiológicos e celulares do organismo, como a taxa de eclosão de ovos, motilidade, produção de espécies reativas de oxigênio (ERO), longevidade, apoptose em células germinativas, dinâmica mitocondrial e integridade dos neurônios dopaminérgicos. Embora a postura de ovos e o crescimento corporal não tenham sofrido alterações relevantes, houve queda na eclosão ao final do período reprodutivo, sugerindo efeitos embrionários tardios. Observou-se também redução significativa dos dobramentos corporais em doses mais altas, indicando possível comprometimento neuromotor. O reteno induziu aumento da produção de ERO e ativou apoptose em células germinativas, além de alterar a morfologia mitocondrial e aumentar a massa dessas organelas, especialmente em concentrações elevadas, possivelmente por falhas na mitofagia. Quanto à longevidade, os resultados revelaram uma resposta não linear, com aumento significativo do tempo de vida médio nas concentrações extremas (1 e 50 μg/mL), o que sugere um possível efeito hormético. Adicionalmente, o reteno induziu neurodegeneração dopaminérgica progressiva e dependente da dose, com efeitos mais intensos nas fases iniciais da exposição. Esses dados reforçam o potencial tóxico do reteno mesmo fora da lista de HPAs prioritários e demonstram a aplicabilidade de C. elegans como modelo eficaz para avaliações toxicológicas ambientais. Os achados contribuem para o entendimento dos mecanismos envolvidos na toxicidade do reteno, destacando o papel central do estresse oxidativo, da disfunção mitocondrial e da neurodegeneração.
Extratos e fases de partição de coccoloba alnifolia: potencial antioxidante, imunomodulador e cicatrizante in vitro
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-03-29) Melo, Luciana Fentanes Moura de; Scortecci, Katia Castanho; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0003-2252-1221; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; https://orcid.org/0000-0002-4690-2785; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; https://orcid.org/0000-0001-9408-2470; http://lattes.cnpq.br/5242815540282484; Câmara, Rafael Barros Gomes da; Oliveira, Riva de Paula; Meneses, Carlos Henrique Salvino Gadelha; Santos, Deborah Yara Alves Cursino dos
O estresse oxidativo é um desequilíbrio entre a produção das espécies reativas e os antioxidantes. O acúmulo de espécies reativas no organismo pode resultar em danos aos tecidos e órgãos, potencialmente induzindo a uma variedade de alterações fisiológicas que comprometem a homeostase e podem ser associadas a doenças cardíacas, neurológicas e câncer, por exemplo. Tem sido observado que compostos fenólicos derivados de plantas apresentam a capacidade de sequestrar, neutralizar e prevenir os radicais livres. A espécie C. alnifolia, uma árvore da mata atlântica, apresenta poucos estudos etnobotânicos. Estudos anteriores do grupo mostraram que os extratos obtidos de suas folhas apresentaram um potencial antioxidante. Assim, neste trabalho, o objetivo foi avaliar o potencial antioxidante, imunomodulatório e cicatrizante dos extratos etanólico (EE) e aquoso (EA) e de duas fases de partição obtidas a partir do extrato aquoso, fases de partição do acetato de etila (FA) e butanólica (FB). Estas duas fases de partição foram escolhidas a partir do perfil obtido após a análise em cromatografia líquida de alta eficiência, acoplada ao detector de diodo (CLAE-DAD). Estas duas fases de partição foram caracterizadas por meio de ensaios in vitro quanto ao potencial antioxidante. Foi observado que ambas o possuem, entretanto, a FB, apresentou maior potencial antioxidante em relação à FA. Entre os resultados da atividade antioxidante obtidos, o que mais chamou a atenção foi a quelação de cobre, que não havia sido observada anteriormente no extrato bruto (EA). A partir destes resultados, foi avaliado o potencial imunomodulatório por meio de ensaios com a célula RAW 267.4. Primeiramente, foi verificado que tanto os extratos quanto as duas fases de partição não foram citotóxicas. Em seguida, considerando a complexidade do processo inflamatório, foi analisado então o efeito de EE e de EA na produção de ROS após o tratamento com lipopolissacarídeo (LPS). Para isso, foram utilizadas três concentrações de extratos (100, 250 e 500 µg/mL). Verificou-se que ambos os extratos foram capazes de reduzir a produção de ROS quando comparados ao controle positivo (tratado com LPS). Além disso, a redução de ROS obtida com o EE foi semelhante ao controle negativo (sem o tratamento com LPS). Posteriormente, foi verificada a capacidade dos extratos e das fases de partição em inibir a produção de óxido nítrico (NO). Tanto os extratos como as fases de partição foram capazes de inibir a produção e a liberação de NO nas três concentrações testadas, de forma dose-dependente, com redução maior que 50%. Ainda em relação aos extratos, foi avaliada a atividade fagocítica, uma vez que essa é importante para a avaliação da atividade imunomoduladora. Essa análise foi realizada apenas com a concentração de 500 μg/mL, e verificou-se uma redução de 30% para EE e de 50% para EA. Considerando que as citocinas são importantes mediadores para a resposta imune e inflamatória, estas foram avaliadas utilizando duas metodologias, como a medição de citocinas por citometria de fluxo, em que houve aumento de IL-17 e por qRT-PCR, em que houve redução de iNOS e de IL-10, pelo EE. Com base nesses resultados, foi avaliado também o potencial dos extratos e das fases de partição na migração celular utilizando a linhagem celular NHI/3T3 (fibroblastos) em culturas submetidas ao ensaio da ferida. Os resultados obtidos mostraram que ambos os extratos e fases de partição, em 24 h, promoveram uma migração celular, tendo um fechamento em torno de 60% da ferida para os extratos, e em 75% para a fase de partição FB, enquanto no controle (sem extrato), a porcentagem de migração celular foi em torno de 40%. Desse modo, os dados aqui apresentados demonstraram que os EE e EA e as fases de partição FA e FB de C. alnifolia, possuem potencial antioxidante, imunomodulador, assim como apresentam a capacidade de induzir a migração celular envolvida no processo de cicatrização de feridas in vitro, propriedades importantes para extratos e fases de partição com potencial para atuar na dinâmica do processo inflamatório e de recuperação de dano tecidual. Com isso, conclui-se que tanto os extratos quanto as fases de partição possuem potenciais aplicações futuras para biotecnologia em saúde.
Identificação de sequências da subfamília Orthocoronavirinae em metagenomas e metatranscriptomas e análise da diversidade genômica do coronavírus humano NL63
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-09-29) Silva, Giovanna Melo Martins; Oliveira, Riva de Paula; Rodrigues, Thiago Bruce; https://orcid.org/0000-0002-6092-6142; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; https://orcid.org/0000-0002-4584-6961; http://lattes.cnpq.br/1182271734264345; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; https://orcid.org/0000-0002-1341-4814; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; Araújo, Josélio Maria Galvão de; Franco, Gloria Regina; Acácio, Stela Mirla da Silva Felipe
O desenvolvimento de tecnologias de sequenciamento de alto rendimento na última década resultou em grandes repositórios de dados brutos de sequenciamento e projetos metagenômicos. Paralelamente, a biologia computacional e a bioinformática se tornaram aliadas importantes, resultando na criação de diversas ferramentas de classificação taxonômica. A pandemia da COVID-19 (Coronavirus Disease 2019) demonstrou a importância de investigar melhor os coronavírus, especialmente os coronavírus humanos que impactam a saúde e os serviços públicos. Entre eles, o HCoV-NL63 é um coronavírus sazonal que afeta os seres humanos, está distribuído globalmente, causa doenças respiratórias leves a moderadas e compartilha o mesmo receptor para entrada no hospedeiro que o SARS-CoV e o SARS-CoV-2. Este trabalho utiliza bancos de dados públicos de sequências para 1) comparar duas ferramentas de bioinformática, Kaiju e Burrows-Wheeler Aligner (BWA), na identificação de sequências virais da subfamília Orthocoronavirinae em metagenomas humanos e 2) realizar uma análise filogenética abrangente do HCoV-NL63. Foram selecionadas aleatoriamente 1169 amostras humanas (de um total de 3670) e a classificação taxonômica foi realizada com o uso do Kaiju (análise de dois passos com diferentes bancos de dados de referência). Usando o Kaiju, foram encontradas 150 amostras positivas para CoVs, no entanto, não foi possível montar nenhum genoma. Além disso, todas as 3670 amostras foram analisadas usando o BWA, com resultados negativos para CoVs, exceto uma amostra que continha sequências do HCoV NL63. Nossos resultados sugerem que as amostras investigadas não continham coronavírus, apenas sequências conservadas e similares entre organismos, o que foi superestimado pela ferramenta Kaiju. Por outro lado, o BWA pode ser utilizado para identificar viromas em diversos produtos de sequenciamento. Neste estudo, também utilizamos 173 sequências de genes de espícula disponíveis publicamente do HCoV-NL63 para realizar a análise filogenética. A análise de máxima verossimilhança resultou em oito subgenótipos (A1, A2, A3, B1, B2, C1, C2 e C3), consolidando a divisão da linhagem B em B1 e B2. Os subgenótipos B2 (20,1%), B1 (19,5%) e C3 (16,1%) foram os mais prevalentes. Foi encontrada seleção positiva nas posições S1 (V57, G96, N431) e S2 (V1177, E1206). Foram detectadas sete substituições não sinônimas na região BLR. Em comparação com outros genótipos, o genótipo B apresenta um número significativo de substituições de aminoácidos na região S1. Nossa análise também identificou uma alta prevalência de eventos de recombinação dentro da região S1 (12-307 aminoácidos). O genótipo A, que apresenta o maior número de eventos de recombinação, mostra um período restrito de surgimento tanto em termos de tempo quanto de local, exibindo um padrão de seleção purificadora. Nossos resultados destacam a importância da vigilância epidemiológica e filogenética contínua, sendo fortemente recomendada para prever a evolução de futuras variantes.
Inibição da função redox de APE1/REF-1 e sua influência na regulação transcricional em um modelo de estimulação inflamatória
(2016-12-09) Fontes, Fabricia Lima; Agnez, Lucymara Fassarella; ; http://lattes.cnpq.br/1083882171718362; ; http://lattes.cnpq.br/2416539159979857; Luchessi, André Ducati; ; http://lattes.cnpq.br/4420863418928278; Machado, Carlos Renato; ; http://lattes.cnpq.br/6306925202374274; Saffi, Jenifer; ; http://lattes.cnpq.br/3179264934205423; Oliveira, Riva de Paula; ; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325
A endonuclease apurínica/apirimidínica 1 (APE1/REF-1) humana é uma enzima multifuncional que possui atividade de reparo de DNA e regulação transcricional, atuando como proteína reguladora de várias vias importantes para a homeostase e sobrevivência da célula. Este trabalho teve como objetivo caracterizar os efeitos da inibição da função redox de APE1/REF-1 em um modelo de inflamação. Como modelo experimental células U937 foram estimuladas com 1 μg/ml de LPS e submetidas a dois diferentes tratamentos com 100 μM de E3330, um inibidor seletivo da função redox de APE1/REF-1. Foi realizada uma cinética de estimulação com um pré-tratamento de 1 hora com LPS e subsequente tratamento com E3330 por 2, 4, 6, 24 e 48 horas. No segundo modelo as células foram estimuladas com LPS por 24 horas e em seguida foi adicionado o E3330 por mais 4 horas. Após os tratamentos foram realizados ensaios de viabilidade celular, expressão de moduladores inflamatórios, avaliação da apoptose e potencial de membrana. Foi realizado também uma análise de transcriptoma utilizando a plataforma 454 GS-FLX Titanium seguida de sua caracterização e categorização e analise de interação proteína-proteína a partir de ferramentas de bioinformática. Para a validação da expressão diferencial e dos modelos propostos foi realizado experimentos de qPCR, western blotting, ensaio de degradação do rRNA, ensaio de incisão do sítio AP utilizando oligos marcados. E por fim foi utilizada a ferramenta iRegulon para localizar os sítios putativos de ligação à fatores de transcrição (FT) nos genes alvo identificados. Os nossos resultados mostram que após 24 horas de estimulação de células U937 com LPS e tratamento subsequente com E3330 durante mais quatro horas não afeta significativamente a viabilidade das células e a razão de apoptose. No entanto, no modelo de cinética inflamatória, foi possível observar uma redução das células viáveis como consequência do tratamento após 48 horas. Verificou-se também uma diminuição significativa de moduladores inflamatórios em presença de E3330. Em relação análise de interação proteína-proteína foi possível observar que as categorias funcionais mais enriquecidas na rede regulada negativamente estão relacionadas com expressão gênica, resposta imune, tradução, processamento de rRNA e biogênese ribossomal. Já na rede regulada positivamente foi observado um enriquecimento para transdução de sinal, resposta ao estresse, modificação da cromatina, resposta ao dano de DNA e regulação positiva da apoptose. Na quantificação de níveis proteicos foi possível observar uma diminuição estatisticamente significante após o tratamento com E3330 para c-Myc, NF- κB(p65), e um aumento da MDM2 de 60 kDa. No ensaio de integridade de rRNA foi observado uma diminuição da razão 28S/18S nas amostras tratadas com E3330 em torno de 12% e 20% em relação ao controle e LPS respectivamente. Todos esses achados são associados a inibição seletiva da função redox de APE1/REF-1, visto que no ensaio de incisão de sítio AP, a concentração de E3330 utilizada não foi capaz de inibir a função de reparo de DNA da proteína. De uma forma geral, para os genes da lista regulada negativamente, os FTs identificados com a ferramenta iRegulon são modulados por regulação redox, e a inibição com E3330 da APE1/REF-1 pode estar alterando a função dos mesmos e por isso diminuindo a expressão dos genes em questão. Assim, nesse trabalho é proposto que o bloqueio seletivo da atividade redox de APE1/REF-1 por E3330 leva a uma redução da resposta inflamatória, bem como uma diminuição nos mecanismos que promovem a biogênese ribossomal e processamento do rRNA sem alterar a sua função de APendonuclease.
Polimorfismos genéticos, microbiota e terapia nutricional em pessoas com transtorno do espectro autista (TEA)
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-12-07) Pessoa, Nyedja Lara Cavalcante; Salha, Daniella Regina Arantes Martins; Lais, Lúcia Leite; 0000-0002-8061-7048; http://lattes.cnpq.br/7939303011096805; http://lattes.cnpq.br/3695151190501921; http://lattes.cnpq.br/4073580332552506; Salha, Daniella Regina Arantes Martins; http://lattes.cnpq.br/3695151190501921; Oliveira, Riva de Paula; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; Borges, Thaís Lima Dias; http://lattes.cnpq.br/6218189772611559
O transtorno do espectro autista (TEA) é uma disfunção no desenvolvimento neurológico que afetam a capacidade de interação, comunicação e linguagem, podendo ser caracterizado por comportamentos repetitivos e seletividade alimentar. Esse transtorno é considerado multifatorial, tendo fatores ambientais e genéticos associados à predisposição do autismo, alterações comportamentais e sintomas gastrointestinais. A microbiota intestinal influencia no funcionamento do eixo intestino-cérebro e no sistema imunológico, causando alterações como disbiose e sinais de autismo, como a ansiedade e auto agressão. Este trabalho consiste em uma revisão de literatura sobre aspectos clínicos e nutricionais do TEA, abrangendo variações genéticas, alterações da microbiota intestinal, desafios alimentares, terapia nutricional e o impacto da nutrigenômica nessa condição clínica. Para a realização desta revisão bibliográfica foram selecionados 87 artigos, dentre os 1.909 encontrados na base de dados PubMed, SciELO, LILACS, Embase e Cochrane Library, com nenhuma restrição de idioma, publicados nos últimos dez anos, que contemplavam a temática desta pesquisa. A partir dos estudos explorados, foi possível analisar a forte relação da genética no TEA, pela ruptura epigenética dos genes essenciais para o desenvolvimento neuronal esperado existentes nos genes CHD8, SHANK3 e ADNP; associação da microbiota intestinal com vários fenótipos e intervenções específicas na terapia nutricional para pessoas com autismo, como dieta sem glúten e caseína, suplementação de probióticos e prebióticos e transplante microbiano fetal. Poucos estudos foram encontrados acerca da nutrigenômica no TEA. Os resultados demonstram a importância da intervenção nutricional bem como a necessidade da compreensão dos fatores genéticos nessa temática.
Suco de laranja liofilizado enriquecido com beta-caroteno proporciona maior capacidade antioxidante e maior redução da proteotoxicidade do peptídeo beta-amiloide e do acúmulo de gordura em Caenorhabditis elegans
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-02-23) Paulo, Iolanda Raquel Ferreira; Oliveira, Riva de Paula; http://lattes.cnpq.br/6790385939188325; http://lattes.cnpq.br/6598518957497450; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; Moreira, Susana Margarida Gomes; http://lattes.cnpq.br/7741233949116498
A laranja (C. sinensis L. Osbeck) é uma das frutas mais cultivadas em todo o mundo, sendo rica em diversos compostos fitoquímicos com benefícios à saúde, como carotenoides e flavonoides. O β-caroteno é um antioxidante bem conhecido devido à sua capacidade de eliminação e supressão de espécies reativas de oxigênio. No entanto, apresenta níveis de acumulação subótimos em frutos na maioria dos cultivares de laranja. A propriedade antioxidante do betacaroteno tem sido associada a efeitos anti-inflamatórios e neuroprotetores, bem como à oxidação lipídica e inibição do acúmulo de gordura. Já foi relatado anteriormente uma laranja geneticamente modificada (GM) enriquecida com β-caroteno mostrou um maior efeito antioxidante in vivo em comparação com as laranjas controle isogênicas não GM. Neste trabalho, expandimos a caracterização das propriedades benéficas à saúde de uma nova laranja enriquecida com β-caroteno obtida por meio de uma estratégia de engenharia metabólica (GS) semelhante à sua contraparte convencional (CV). Usando o modelo in vivo C. elegans, tratamos esses animais com ambas as laranjas para avaliar se a laranja GS possui um maior efeito antioxidante, neuroprotetor e hipolipodêmico que a CV. Obtivemos que os animais tratados com GS demonstraram maior redução nas espécies reativas de oxigênio intracelular, maior resistência ao estresse oxidativo e indução na expressão de genes antioxidantes (gcs-1 e sod-3), resposta neuroprotetora mais efetiva em uma cepa modelo de Alzheimer (CL2006), e maior efeito hipolipidêmico sob dieta rica em glicose, comparando com animais tratados com CV. Estes dados, além de demostrar que o aumento na quantidade de β-caroteno na laranja é realmente capaz de proporcional uma maior capacidade antioxidante no C. elegans, também fornecem uma valiosa prova de princípio para subsidiar novos estudos em mamíferos e humanos visando à prevenção e promoção da saúde.
XPA deficiency affects the ubiquitin-proteasome system function
(Elsevier, 2020-07) Leal, Angélica Maria de Sousa; Medeiros, Lázaro Batista de Azevedo; Muñoz-Cadavid, Cesar Orlando; Oliveira, Riva de Paula; Timóteo, Ana Rafaela de Souza; Oliveira, Ana Helena Sales de; Faustino, André Luis Fonseca; Silva, Vandeclécio Lira da; Souza, Sandro José de; Lajus, Tirzah Braz Petta; Campos, Julliane Tamara Araújo de Melo; Agnez-Lima, Lucymara Fassarella
Xeroderma pigmentosum complementation group A (XPA), is defective in xeroderma pigmentosum patients, causing pre-disposition to skin cancer and neurological abnormalities, which is not well understood. Here, we analyzed the XPA-deficient cells transcriptional profile under oxidative stress. The imbalance in of ubiquitin-proteasome system (UPS) gene expression was observed in XPA-deficient cells and the involvement of nuclear factor erythroid 2-related factor-2 (NFE2L2) was indicated. Co-immunoprecipitation assays showed the interaction between XPA, apurinic-apyrimidinic endonuclease 1 (APE1) and NFE2L2 proteins. Decreased NFE2L2 protein expression and proteasome activity was also observed in XPA-deficient cells. The data suggest the involvement of the growth arrest and DNA-damage-inducible beta (GADD45β) in NFE2L2 functions. Similar results were obtained in xpa-1 (RNAi) Caenorhabditis elegans suggesting the conservation of XPA and NFE2L2 interactions. In conclusion, stress response activation occurs in XPA-deficient cells under oxidative stress; however, these cells fail to activate the UPS cytoprotective response, which may contribute to XPA patient’s phenotypes.

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