Navegando por Autor "Migliolo, Ludovico"
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Artigo Characterization and pharmacological properties of a novel multifunctional kunitz inhibitor from erythrina velutina seeds(PloS One, 2013-05) Morais, Ana Heloneida de Araújo; Machado, Richele Janaína Araújo; Monteiro, Norberto de Kássio Vieira; Migliolo, Ludovico; Silva, Osmar Nascimento; Pinto, Michele Flaviane Soares; Oliveira, Adeliana; Franco, Octávio Luiz; Kiyota, Sumika; Bemquerer, Marcelo Porto; Uchôa, Adriana Ferreira; Santos, Elizeu Antunes dosInhibitors of peptidases isolated from leguminous seeds have been studied for their pharmacological properties. The present study focused on purification, biochemical characterization and anti-inflammatory and anticoagulant evaluation of a novel Kunitz trypsin inhibitor from Erythrina velutina seeds (EvTI). Trypsin inhibitors were purified by ammonium sulfate (30–60%), fractionation followed by Trypsin-Sepharose affinity chromatography and reversed-phase high performance liquid chromatography. The purified inhibitor showed molecular mass of 19,210.48 Da. Furthermore, a second isoform with 19,228.16 Da was also observed. The inhibitor that showed highest trypsin specificity and enhanced recovery yield was named EvTI (P2) and was selected for further analysis. The EvTI peptide fragments, generated by trypsin and pepsin digestion, were further analyzed by MALDI-ToF-ToF mass spectrometry, allowing a partial primary structure elucidation. EvTI exhibited inhibitory activity against trypsin with IC50 of 2.261028 mol.L21 and constant inhibition (Ki) of 1.061028 mol.L21 , by a non-competitive mechanism. In addition to inhibit the activity of trypsin, EvTI also inhibited factor Xa and neutrophil elastase, but do not inhibit thrombin, chymotrypsin or peptidase 3. EvTI was investigated for its anti-inflammatory and anticoagulant properties. Firstly, EvTI showed no cytotoxic effect on human peripheral blood cells. Nevertheless, the inhibitor was able to prolong the clotting time in a dose-dependent manner by using in vitro and in vivo models. Due to antiinflammatory and anticoagulant EvTI properties, two sepsis models were here challenged. EvTI inhibited leukocyte migration and specifically acted by inhibiting TNF-a release and stimulating IFN-a and IL-12 synthesis. The data presented clearly contribute to a better understanding of the use of Kunitz inhibitors in sepsis as a bioactive agent capable of interfering in blood coagulation and inflammationDissertação Construção de modelos de interação in silico e in vitro do inibidor do tipo Kunitz de Adenanthera pavonina L. para as enzimas cisteínicas e serínicas(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2008-07-02) Migliolo, Ludovico; Sales, Maurício Pereira de; ; http://lattes.cnpq.br/7890362793618911; ; http://lattes.cnpq.br/0805599101682606; Lima, João Paulo Matos Santos; ; http://lattes.cnpq.br/3289758851760692; Franco, Octávio Luiz; ; http://lattes.cnpq.br/8598274096498065Os inibidores de proteinases serínicas (IPs) estão extensamente distribuídos na natureza e inibem a atividade enzimática in vitro e in vivo. Estes IPs em sementes de leguminosas compreendem sete famílias, no entanto as famílias Bowman-Birk e do tipo Kunitz são as mais estudadas e representam um papel importante na primeira linha de defesa contra insetos pragas. Alguns inibidores do tipo Kunitz possuem atividades para proteinases serínicas e cisteínicas sendo denominados inibidores bifuncionais, como o inibidor ApTKI da semente de Adenanthera pavonina. O inibidor de A. pavonina por apresentar essa característica incomum aos inibidores dessa família foi utilizado para o estudo da interação entre as proteinases serínica (tripsina) e cisteínica (papaína). Para determinar a interação in vitro de ApTKI e as enzimas alvo foi realizada a purificação do inibidor a partir de técnicas cromatográficas e ensaios de inibição. O modelo 3D do inibidor bifuncional ApTKI foi construído pelo programa SWISS-MODEL através da metodologia de modelagem por homologia utilizando como molde o inibidor de tripsina de soja (STI, pdb:1ba7) que apresentou 40% de identidade com a proteína alvo. A qualidade do modelo foi avaliada pelo programa PROCHECK. Para a análise do complexo in silico entre as enzimas alvo e o inibidor foi utilizado o programa HEX 4.5. Estes resultados confirmaram os ensaios inibitórios in vitro, onde ApTKI apresentou a capacidade de inibir simultaneamente tripsina e papaína. Algumas das diferenças observadas nos resíduos do sitio reativo explicam a forte afinidade para tripsina e a fraca para papaínaArtigo Dual insecticidal effects of Adenanthera Pavonina kunitz-type inhibitor on Plodia Interpunctella is mediated by digestive enzymes inhibition and chitin-binding properties(MDPI, 2019-11-28) Oliveira, Caio Fernando Ramalho de; Flores, Taylla Michelle de Oliveira; Cardoso, Marlon Henrique; Oshiro, Karen Garcia Nogueira; Russi, Raphael; França, Anderson Felipe Jácome de; Santos, Elizeu Antunes dos; Franco, Octávio Luiz; Oliveira, Adeliana Silva de; Migliolo, LudovicoThe Indianmeal moth, Plodia interpunctella, is one of the most damaging pests of stored products. We investigated the insecticidal properties of ApKTI, a Kunitz trypsin inhibitor from Adenanthera pavonina seeds, against P. interpunctella larvae through bioassays with artificial diet. ApKTI-fed larvae showed reduction of up to 88% on larval weight and 75% in survival. Trypsin enzymes extracted from P. interpunctella larvae were inhibited by ApKTI, which also demonstrated capacity to bind to chitin. Kinetic studies revealed a non-competitive inhibition mechanism of ApKTI for trypsin, which were further corroborated by molecular docking studies. Furthermore, we have demonstrated that ApKTI exhibits a hydrophobic pocket near the reactive site loop probably involved in chitin interactions. Taken together, these data suggested that the insecticidal activity of ApKTI for P. interpunctella larvae involves a dual and promiscuous mechanisms biding to two completely different targets. Both processes might impair the P. interpunctella larval digestive process, leading to larvae death before reaching the pupal stage. Further studies are encouraged using ApKTI as a biotechnological tool to control insect pests in field conditionsTese Efeitos de um inibidor do tipo Kunitz de sementes de Mimosa regnellii Benth sobre eventos celulares da linhagem tumoral B16-F10(2016-10-25) Rabêlo, Luciana Maria Araújo; Santos, Elizeu Antunes dos; ; ; Dore, Celina Maria Pinto Guerra; ; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; ; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; Migliolo, Ludovico;O câncer é um termo utilizado para representar um conjunto de mais de 200 patologias, incluindo tumores malignos de diferentes localizações. Vários são os mecanismos que contribuem para a carcinogênese: sinal proliferativo sustentado, desregulação da energia celular, evasão a apoptose, indução a angiogênese, replicação ilimitada, entre outros. Dentre os principais tipos de câncer existentes, o câncer de pele se destaca: surge nos melanócitos e é o mais frequente no Brasil, correspondendo a 30% de todos os tumores malignos registrados no País. Melanomas em estágio inicial podem, na maioria das vezes, ser tratados apenas com cirurgia, porém os cânceres mais avançados requerem outros tratamentos. Neste trabalho, um inibidor de tripsina do tipo Kunitz foi purificado de sementes da leguminosa Mimosa regnellii Benth (ITJ), parcialmente caracterizado e avaliado quanto sua toxicidade frente a linhagens de células tumorais, atuando especificamente com um IC50 de 0,65 μM em linhagem celular B16-F10, não apresentando toxicidade frente a linhagens de células não transformadas. Sua capacidade de induzir morte celular pela via de apoptose em células de melanoma de camundongo B16-F10 também foi avaliada, através de citometria de fluxo com os marcadores Anexina V-FITC/PI, induzindo cerca de 45% das células a apoptose. Além disso, o inibidor também foi avaliado quanto a sua capacidade de: alterar o potencial de membrana mitocondrial, visualizado por experimentos em citometria de fluxo utilizando a sonda Rodamina123 e microscopia confocal com o marcador Mitotracker Red, onde foi capaz de alterar de forma significativa o ΔΨm; Liberar espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, através de sondas específicas visualizadas por técnicas de microscopia, causando liberação de ROS na concentração de IC50, porém não influenciando liberação de ERNs; Liberar cálcio citosólico, evento que influencia na ativação de apoptose, com efeito significativo em células B16-f10; Inibir atividade angiogênica de células endoteliais de coelho, através de experimentos de inibição de formação de novos vasos em matrigel, análise da expressão de VEGF por técnicas de western Blotting e redução da expressão de IL-6 analisado por microscopia confocal; Inibir o processo de migração celular em ensaio de indução de ferimento e análise em microscopia e, por fim, a alterar a morfologia celular de B16-F10, analisada por incubação com anticorpos específicos para componentes da matriz extracelular e filamentos intermediários das células de melanoma, realizados em microscopia de fluorescência. Todos esses resultados reunidos favorecem a proposição de um possível mecanismo de ação de ITJ na indução de morte celular por apoptose em células B16-F10, onde o inibidor atuaria inicialmente aumentando os níveis de cálcio citosólico e ROS, alterando posteriormente a expressão de p53 em 36h de incubação, que agiriam alterando o metabolismo mitocondrial, ativando vias de apoptose dependentes da participação de caspases; ITJ também atuaria inibindo processos migratórios até 18 horas de exposição, além de influenciar de forma tardia na inibição do processo angiogênico in vitro. Estes resultados sugerem que ITJ apresenta potencial para ser utilizado como fármaco em tratamento adjuvante contra melanomas, devido a sua especificidade e baixa dosagem quando comparado a outras moléculas bioativas.Tese Lectina manganês-dependente da peçonha de bothrops moojeni com atividade bacteriostática: isolamento e caracterização(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2024-10-15) Nunes, Ellynes Amancio Correia; Migliolo, Ludovico; Luna, Karla Patrícia de Oliveira; https://orcid.org/0000-0002-6027-9109; http://lattes.cnpq.br/0781953872281542; Uchôa, Adriana Ferreira; https://orcid.org/0000-0002-3822-6502; http://lattes.cnpq.br/6644671747055211; Santos, Elizeu Antunes dos; Zuliani, Juliana Pavan; Franco, Octávio LuizA rica diversidade de moléculas bioativas presentes em peçonhas de animais oferece um vasto potencial para o desenvolvimento de novos fármacos. As peçonhas ofídicas são um complexo de molecular proteico, cuja diversidade de toxinas e seus mecanismos de ação explicam a variedade de manifestações clínicas observadas em envenenamentos por serpentes. O estudo das proteínas da peçonha ofídica permite explorar suas atividades biológicas. Nesse contexto, objetivou-se investigar o potencial biotecnológico de lectinas presentes na peçonha de Bothrops moojeni. A partir da revisão bibliográfica sobre lectinas ofídicas, foi formulada a hipótese de que essas proteínas podem apresentar atividades antibióticas. Para testar essa hipótese, foram realizados o isolamento, a caracterização bioquímica e a avaliação das atividades biológicas de uma lectina purificada da peçonha. O isolamento e identificação da lectina foi realizado por cromatografia de exclusão molecular em coluna de Sephacryl S-100, equilibrada com tampão bicarbonato de amônio 50 mM e pH 7,8, com vazão de 680 µL.min-1. As frações com atividade hemaglutinante foram submetidas a cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa em coluna C18, utilizando um gradiente linear de acetonitrila e água em ácido trifluoroacético 0,1% como fase móvel. A pureza da proteína foi avaliada por eletroforese em gel de poliacrilamida SDS-PAGE 12,5%, sob condições redutoras. A presença de lectinas nas diferentes frações foi monitorada pela atividade hemaglutinante utilizando eritrócitos humanos a 2% (v/v) em PBS. A determinação de especificidade e dependência de íons foi investigada por hemaglutinação na presença de diferentes açúcares e íons, respectivamente. A influência do pH e temperatura na atividade hemaglutinante foi investigada em uma faixa de pH de 2 a 11, temperaturas de -4 a 100°C. A atividade hemolítica foi avaliada pela liberação de hemoglobina de eritrócitos de sangue humano tipo A, em uma concentração de 2% v:v, utilizando o método de espectrofotometria a 425 nm. A atividade antibacteriana contra Acinetobacter baumannii e Staphylococcus aureus foi determinada por ensaios modificados de inibição do crescimento por micro diluição em caldo. A formação de biofilme foi quantificada pelo método de cristal violeta. A cromatografia de exclusão molecular resultou em um perfil com seis frações proteicas distintas. A análise por ensaios de hemaglutinação revelou que as frações 5 e 6 apresentavam atividade hemaglutinante. A fração 5, com maior atividade, foi denominada BmoojL. A caracterização bioquímica da lectina BmoojL revelou que sua atividade é dependente de manganês e inibida por diversos monossacarídeos, como glicose, frutose e manose. Além disso, a proteína mostrou-se estável em uma ampla faixa de pH (5-9) e temperatura (até 80°C). BmoojL não foi hemolítica nas concentrações avaliadas (31,25-500 µg. mL-1), com porcentagem de hemólise abaixo de 10%. Os ensaios antibacterianos mostraram que apesar de não ter atingido a concentração inibitória mínima, BmoojL reduziu o crescimento bacteriano de A. baumannii a partir da concentração de 64 µg.mL-1 sendo, portanto, bacteriostática. O ensaio antibiofilme mostrou que para S. aureus, BmoojL foi efetivo, reduzindo consideravelmente o crescimento do biofilme em todas as concentrações testadas (16 - 512 µg.mL-1) em cerca de 50%. Dessa forma, o estudo permitiu isolar uma molécula com atividade lectínica manganês dependente com potencial para exercer atividade bacteriostática e antibiofilme, contribuindo para a pesquisa de moléculas bioativas derivadas de serpentes peçonhentas. Embora haja alguns estudos envolvendo tais moléculas e suas atividade heterólogas, quando comparado a outros grupos moleculares, o estudo envolvendo as lectinas de serpentes é uma área ainda pouco explorada, e esses achados mostram o que ainda há para se conhecer acerca destas moléculas e direcionar e propor novas atividades que venham somar as pesquisas biotecnológicas envolvendo esses grupos animais.Tese Prospecção de extratos de Tephrosia toxicaria Pers. para controle de nematoides das galhas e desenvolvimento de bionanoformulações derivadas dos extratos para aplicação como nematicida na agricultura(2018-11-30) Moreira, Francisco José Carvalho; Uchoa, Adriana Ferreira; Maciel, Maria Aparecida Medeiros; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; Macedo, Gorete Ribeiro de; Macedo, Leonardo Lima Pepino de; Migliolo, LudovicoDentre os fitonematoides, o gênero Meloidogyne se sobressai, devido a sua plasticidade genética, versatilidade e adaptabilidade, o que os coloca como o principal grupo causador de danos à agricultura. Vários compostos de origem vegetal apresentam atividade nematicida, são rentáveis e ambientalmente seguros, podendo ser utilizados em sistemas de agricultura biológica, contudo, muitos destes produtos se degradam com facilidade, reduzindo a persistência, dificultando a eficiência do controle. Nesse sentido, a nanoencapsulação de pesticidas botânicos apresenta-se como uma tecnologia formidável, podendo transformar o estado físico das substâncias para melhor manipulação, possibilitando a otimização de formulações com liberação controlada, evitando assim a sua degradação, decorrente de condições adversas. Assim, objetivou-se neste trabalho a avaliar a atividade nematicida in vivo dos extratos aquosos e hidroalcoólicos de caules, folhas e raízes de Tephrosia toxicaria no controle de alternativo de nematoide das galhas (Meloidogyne enterolobii e M. javanica) em tomate ‘Pati’ e sua avaliação ambiental por meio da citotoxicidade em células 3T3 e ecotoxicidade no solo em Caenorhabditis elegans. Em seguida, outro conjunto de ensaios para avaliar o efeito in vitro dos extratos aquosos e hidroalcoólicos livres e veiculados em sistema coloidal SNEDDS das raízes de T. toxicaria sobre nematoide das galhas (M. enterolobii e M. javanica) e sua avaliação ambiental, com ecotoxicidade aquática em microcrustáceo (Ceriodaphinia dubia) e de fitotoxicidade em alface (Lactuca sativa). Os resultados demonstram que extratos aquosos de folhas, caules e raízes de T. toxicaria foram eficientes no controle de M. enterolobii e M. javanica, sendo que os de folhas e raízes mostraram-se mais promissores, a partir da concentração de 0,8%, revelando o potencial destes para o desenvolvimento de alternativas para o controle de nematoides das galhas com baixo custo e baixo risco ambiental. Quanto ao segundo ensaio, observou-se que o extrato aquoso livre, inibiu a eclosão e causou a mortalidade (100%) dos J2 a partir de 0,2%; enquanto extrato hidroalcoólico livre inibiu a eclosão a partir de 0,1% e provocou mortalidade total a partir de 0,2%, com comportamento semelhante para ambos os nematoides. Sendo o extrato hidroalcoólico, o que proporcionou maior inibição da eclosão e mortalidade dos juvenis. Com a veiculação dos extratos em sistema coloidal SNEDDS (Self-nanoemulsifying drug delivery systems), contendo os extratos aquosos e hidroalcoólicos de raízes de T. toxicaria mostraram-se efetivos, in vitro, inibição completa da eclosão a partir de 0,10 e 0,025%, respectivamente; e mortalidade total a partir de 0,050% nos dois tipos de extratos veiculados; quanto à ecotoxicidade, verificou-se ainda que os extratos livres provocaram mortalidade apenas nas duas concentrações mais elevadas (1,6 e 3,2%), enquanto os extratos veiculados não apresentaram toxidez aquática ao microcrustáceo (C. dubia); quanto a fitotoxicidez sobre a germinação de sementes de alface (L. sativa) ‘Babá de Verão’ não houve efeito danoso. Considerando esses resultados, podemos concluir que os extratos polares de T. toxicaria apresentam potencial para aplicação como nematicida botânico. O sistema SNEDDS apresentou eficiência como sistema carreador das biomoléculas dos extratos aquoso e hidroalcoólico de T. toxicaria, melhorando o efeito nematicida dos princípios ativos. O conjunto de dados apresentados indicam os extratos de T. toxicaria como uma alternativa ao controle de nematoide das galhas, com significativo efeito a baixas concentrações e com razoável segurança ambiental. O sistema SNEDDS, carreador dos extratos polares demonstrou potencial como um novo insumo para o manejo de nematoides das galhas, podendo, portanto, resultar numa formulação que poderá ser empregada comercialmente na agricultura, a qual resultou em um depósito de patente junto ao Instituto Nacional da Propriedade Industrial (INPI).Tese Uma proteína de sementes de Lachesiodendron viridiflorum: uma alternativa para combate de agentes microbianos e células tumoriais(2018-08-31) França, Anderson Felipe Jácome de; Santos, Elizeu Antunes dos; Migliolo, Ludovico; ; ; ; Uchoa, Adriana Ferreira; ; Soares, Ana Katarina Menezes da Cruz; ; Lima, Jailma Almeida de; ; Silveira, Raniere Fagundes de Melo;Sementes são reservatórios de moléculas com grande potencial para a obtenção de bioprodutos e por este motivo uma especial atenção tem sido direcionada na busca de proteínas bioativas com ação antimetabólica e outras propriedades farmacológicas. Algumas sementes apresentam proteínas e peptídeos que, sozinhos, desempenham múltiplas funções tais como interações com membranas de bactérias causando disrupção, atividade fungicida e antitumoral, recrutamento de macrófagos e neutrófilos (uma ação definida como imunomodulação) e atividade hemolítica. Neste trabalho, uma prospecção de proteínas com atividade multifuncional foi realizada em extratos de sementes de quatro espécies da família Fabaceae: Senna spectabilis (Cássia-do-nordeste), Anadenanthera colubrina (Angico), Adenanthera pavonina (Carolina) e Lachesiodendron viridiflorum (Jurema-Juquiri). Os extratos foram testados com relação à presença de atividades antitríptica, antipapaínica, hemaglutinante, hemolítica e citotoxicidade sobre linhagem de célula não tumoral e, dentre eles, se destacou o extrato de L. viridiflorum, cuja proteína denominada LvP foi purificada e escolhida para os estudos posteriores. Quando analisada por SDS-PAGE, LvP apresentou uma massa molecular de aproximadamente 17 kDa, com atividades hemolítica e citotóxica para células mononucleares. Não apresentou atividade tóxica para a linhagem celular 3T3, entretanto, em baixas concentrações, LvP foi capaz de afetar a viabilidade celular das linhagens tumorais HeLa, Hep G2, HT29, B16, A-375 e A2058. LvP também foi deletéria para os fungos Candida albicans, C. tropicalis, C. dubliniensis, C. glabrata e C. parapsilosis. Todavia, quando testada contra as bactérias patogênicas Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Staphylococcus aureus resistente à meticilina - MRSA, nenhuma atividade bactericida foi detectada. Quando a LvP foi associada aos antibióticos de referência, e testada novamente contra as bactérias, ela foi capaz de reduzir o CIM do antibiótico em até uma diluição para todas as três espécies, caracterizando assim uma atividade sinérgica da proteína. Baseado nos dados obtidos, a LvP isolada corresponde a uma estrutura proteica multifuncional, e suas propriedades antitumoral, antimicrobiana, fungicida e bactericida precisam ser investigadas com mais detalhes para que seu potencial biotecnológico seja melhor avaliado.Tese Structural evaluation and antimicrobial activity of analog peptides from stigmurin(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-12-16) Parente, Adriana Marina e Silva; Pedrosa, Matheus de Freitas Fernandes; http://lattes.cnpq.br/2929963416385218; http://lattes.cnpq.br/5123059864977473; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; https://orcid.org/0000-0003-2252-1221; http://lattes.cnpq.br/4651814546820796; Migliolo, Ludovico; Machado , Richele Janaina Araújo; Laurence , Sylvie ChevalierOs peptídeos antimicrobianos (PAMs) são considerados uma das primeiras linhas de defesa contra microrganismos, apresentando amplo espectro de ação antimicrobiana contra bactérias, fungos, vírus e parasitas. Em um estudo do transcriptoma da glândula da peçonha do Tityus stigmurus foi identificado um PAM denominado Stigmurina, a partir desta molécula foram desenhados, alterando resíduos de aminoácidos por lisina, dois peptídeos análogos denominados StigA6 e StigA16. Já foi comprovada a maior atividade destes peptídeos contra bactérias Gram-negativas e Gram-positivas e em parasitas in vitro quando comparados com o peptídeo nativo. Portanto, para aprofundar os estudos destes peptídeos, nesse trabalho propõe-se a análise estrutural pela interação destes com vesículas lipídicas e por ressonância magnética nuclear (RMN), a avaliação da atividade antimicrobiana in vitro e in vivo em modelos de infecção de larvas e no modelo animal de sepse polimicrobiana. Quanto a sua atividade antimicrobiana in vitro, os peptídeos mostraram alta atividade contra cepas de bactérias S. aureus e P. aeruginosa multirresistentes, bem como elevada atividade anti-biofilme. Nos dois modelos in vivo de atividade antibacteriana os peptídeos se revelaram capazes de controlar a infecção, bem como controlar parâmetros imunológicos. No estudo de interação com vesículas percebeu-se que ambos os peptídeos apresentaram uma maior interação com vesículas miméticas bacterianas do que vesículas miméticas de eucariotos. No estudo realizado por RMN os peptídeos se mostraram altamente anfipáticos e com estruturação em hélice. Sendo assim, estes peptídeos podem ser alvos importantes na investigação de novas moléculas anti-infecsiosas.Dissertação Vicilina de sementes da leguminosa selvagem Anadenanthera macrocarpa: purificação, caracterização, efeito deletério e mecanismo de ação para Callosobruchus maculatus(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2013-10-29) França, Anderson Felipe Jácome de; Uchoa, Adriana Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6644671747055211; ; http://lattes.cnpq.br/6032490085835412; Lanza, Daniel Carlos Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/6851351991421755; Migliolo, Ludovico; ; http://lattes.cnpq.br/0805599101682606Sementes de leguminosas são alimentos que compõem a base das dietas de diversas culturas ao redor do mundo, tendo uma importante contribuição nas necessidades diárias de nutrientes dos seres humanos. As globulinas 7S (vicilinas) são proteínas de reserva encontradas em sementes de leguminosas, e podem apresentar uma função adicional de defesa constitutiva do embrião contra pragas e patógenos. Neste trabalho uma vicilina de Anadenanthera macrocarpa - AmV (Angico-vermelho), foi purificada e parcialmente caracterizada. Seu efeito sobre o desenvolvimento, sobrevivência larval e emergência dos adultos de Callosobruchus maculatus foram avaliados pela determinação das LD50, WD50 e ED50 em sistema de bioensaio. A purificação da vicilina foi iniciada por cromatografia de afinidade à quitina e posteriormente em cromatografia de gel filtração Superdex 75 Tricorn 10x300 mm no sistema de FPLC, seguida por cromatografia de fase reversa C8 phenomenex em sistema HPLC. Por SDS-PAGE, AmV dissociou-se em quatro subunidades principais com aproximadamente 73, 70, 43 e 41 kDa, e quando submetida à eletroforese a 12% em condições nativas apresentou uma banda única de característica eletroforética ácida. Nos bioensaios, a WD50 e a LD50 para as larvas foram de 0,32% e 0,33% (p:p) respectivamente, já para os adultos a ED50 foi de 0,096%. O provável mecanismo de ação foi avaliado por ensaios de digestibilidade da AmV in vitro, sendo observado o envolvimento de dois fragmentos de vicilinas imunorreativos contra anticorpo policlonal Anti-vicilinas de Erythrina velutina (Anti- EvV), de aproximadamente 22 e 13 kDa ligantes à quitina. A AmV na sua forma nativa foi reconhecida pelo anticorpo anti-EvV, indicando que existe uma provavel região conservada nas vicilinas, que pode corresponder à domínios de ligação à quitina. Estes resultados apontam para uma nova vicilina que pode vir a ser utilizada como um possível bioinseticida de origem proteica, de maneira a controlar o inseto praga C. maculatus, bem como corroborar com achados da literatura que demonstram em vicilinas de diferentes espécies a existência de regiões conservadas ligantes à quitina ainda não caracterizados