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Análise do desempenho cognitivo de ratos Wistar idosos uma semana após injeção aguda de LSD
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2022-12-15) Silva, Rebeka Nogueira da; Ribeiro, Sidarta Tollendal Gomes; Silva, Felipe Augusto Cini; 0000-0002-7252-8854; http://lattes.cnpq.br/4460804080210061; 0000-0001-9325-9545; http://lattes.cnpq.br/0649912135067700; 0000-0002-8741-3195; http://lattes.cnpq.br/5940327210865514; Souza, Annie da Costa; 0000-0002-5081-3953; http://lattes.cnpq.br/9697174530550588; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; http://lattes.cnpq.br/0972767522303368
A cognição é um processo multifatorial que compreende uma série de habilidades cognitivas tais como aprendizado, memória, atenção, linguagem e tomada de decisão, e sofre seu declínio de forma considerável no processo de envelhecimento. Agonistas serotoninérgicos, entre eles psicodélicos, são estudados como agentes que atuam na melhora de funções cognitivas, pois parecem facilitar a aprendizagem e recuperação de memória. Psicodélicos como o dietilamida do ácido lisérgico (LSD) já foram apontados na literatura como alvo de estudo para controle da ansiedade e depressão em ratos, bem como no aprimoramento de aprendizado e memória. Outra maneira de recuperar as habilidades cognitivas em declínio no envelhecimento se dá pela exposição a um ambiente enriquecido. Esse estudo tem como objetivo geral investigar se uma dose aguda de LSD, combinado com o ambiente enriquecido, é capaz de melhorar a memória e ansiedade de ratos Wistar idosos (14-29 meses) uma semana após a injeção, através das tarefas de reconhecimento de objeto, condicionamento aversivo e labirinto em cruz elevado. A análise dos nossos resultados sugere que uma única dose de 0,13mg/kg de LSD não foi capaz de melhorar a memória dos ratos idosos ou causar efeito ansiolítico quando comparado com o grupo que recebeu uma dose de salina. Sugerimos algumas hipóteses para interpretar esses resultados. É possível que uma única dose não tenha sido suficiente para apresentar efeitos em ratos demasiadamente idosos, e que a exposição ao ambiente enriquecido por ambos os grupos possa ter contribuído para uma melhoria basal do comportamento dos animais.
Atividade imunomoduladora de diferentes extratos obtidos da espécie Plukenetia volubilis Linneo (Euphorbiaceae stricto sensu)
(2017-12-21) Nascimento, Ana Karina de Lima; Scortecci, Katia Castanho; Rocha, Hugo Alexandre de Oliveira; ; ; ; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; ; Lima, Jailma Almeida de; ; Silveira, Raniere Fagundes de Melo; ; Giordani, Raquel Brandt;
A inflamação é um mecanismo de resposta do hospedeiro contra agressões e injúrias e que deve ser finamente regulada para evitar o desequilíbrio homeostático do organismo, prevenindo também o surgimento de doenças. Em virtude da ocorrência de efeitos adversos associados aos imunomoduladores sintéticos, tais como problemas cardiovasculares e gastrointestinais, a busca por imunomoduladores de fontes naturais, especificamente de origem vegetal, tem se tornado uma boa alternativa no desenvolvimento de novos agentes terapêuticos. Dentro desse contexto, a espécie Plukenetia volubilis L., pertencente à família Euphorbiaceae stricto sensu (ss), se enquadra como uma representante do reino vegetal de alto valor biológico. Há ocorrência de relatos etnobotânicos de sua utilização no tratamento de lesões de pele, sendo necessária uma comprovação científica destes dados. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade imunomoduladora in vitro e in vivo de extratos de folhas da espécie Plukenetia volubilis Linneo. Para isto, foram realizados testes in vitro utilizando macrófagos da linhagem RAW 264.7 e in vivo utilizando camundongos BALB/C. Os resultados do presente trabalho mostram que os extratos de P. volubilis estimularam a atividade de redução do composto MTT pelas desidrogenases mitocondriais dos macrófagos com ausência de citotoxicidade nas concentrações utilizadas (100, 250 e 500 μg/mL). Macrófagos estimulados com LPS e tratados com os diferentes extratos apresentaram redução significativa na produção de óxido nítrico (NO), em comparação com o controle. As porcentagens de produção de NO para os extratos metanólico (EM), aquoso (EA), hexânico (EH), etanólico (EE) e clorofórmico (EC) foram de 56%, 64%, 64,1%, 65% e 72%, respectivamente. Com relação à dosagem de citocinas e à quantificação da expressão relativa de seus genes, verificou-se que para a maioria houve uma redução da expressão, com exceção de TNF-α que apresentou expressão relativa acima do controle após tratamento com os extratos EH, EC e EA. Os extratos EH, EC e EA, provavelmente, agem inibindo COX-2 e iNOS via inibição do fator de transcrição NfΚB, enquanto que para TNF-α seu mecanismo de ação supostamente ocorre por outra via independente. No ensaio in vivo os extratos EA e EE inibiram a migração de leucócitos para cavidade peritoneal de camundongos induzidos a peritonite. Desta forma, conclui-se que os compostos presentes nos extratos de folhas de P. volubilis são agentes promissores no desenvolvimento de novas formas alternativas para o tratamento de doenças inflamatórias, uma vez que agem modulando a resposta inflamatória por meio da modulação na síntese das citocinas.
Avaliação morfológica e enzimática de plantas de Psidium spp. infectadas com Meloidogyne enterolobii
(2016-09-30) Araújo, Emanuela de Oliveira Alves; Scortecci, Katia Castanho; ; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; ; http://lattes.cnpq.br/6039459426573249; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; ; http://lattes.cnpq.br/0972767522303368; Sabry, Diego de Araújo; ; http://lattes.cnpq.br/3279791999280557
A goiabeira (Psidium guajava L.) é amplamente cultivada por seus frutos comestíveis, ocupando lugar importante entre as frutas tropicais brasileiras. No entanto, a produção da goiabeira vem sendo prejudicada e inviabilizada em várias áreas de cultivo, tendo como principal fator responsável, a infecção parasitária do Meloidogyne enterolobii. Logo, considerando a problemática dos danos promovidos pelo M. enterolobii, este trabalho teve como objetivo analisar as possíveis alterações morfológicas e enzimáticas, para entender os danos do estresse ocasionado aos 26 dias após a infecção (DAI), em plantas de Psidium spp. quando infectadas pelo nematoide M. enterolobii. Para isso, foram utilizados exemplares de goiabeira (Psidium guajava cv ‘Paluma’), consideradas susceptíveis ao nematoide, e araçazeiro da Costa Rica (Psidium friedrichstalianium), por ser uma espécie resistente ao nematoide e, por isso, ser utilizada como porta enxerto para P. guajava. Os exemplares, ao completarem quarenta dias após plantio em casa de vegetação, foram submetidos à inoculação do nematoide M. enterolobii e, aos 26 dias após a infecção com o nematoide, foram coletadas folhas e raízes para análise morfológica (determinação de área foliar), análises anatômica e histológica da raiz (análise de seções anatômicas transversais e longitudinais) e análises enzimáticas (análises de atividades de catalase, ascorbato peroxidase e peroxidase do guaiacol). Em paralelo, foi realizada uma pesquisa in silico de sequências de microarranjo relacionadas com a resistência ao estresse biótico em Arabidopsis thaliana com o intuito de identificar genes associados a este processo e que possam ser utilizados como marcadores para Psidium spp. no futuro. As análises morfológica e histológica comprovaram os danos causados pela infecção do M. enterolobii em goiabeiras e araçazeiros da Costa Rica. Foi verificado que a área foliar (AF) diminui com a infecção do M. enterolobii em P. friedrichstalianium e, em P. guajava, houve um aumento na AF. As alterações nas estruturas histológicas foram perceptíveis, aonde foi possível observar nos exemplares infectados a ocorrência de galhas nas raízes, a presença de células desordenadas, hiperplasia e hipertrofia celular, danos no xilema e possíveis formações de sítios de alimentações. Com as análises enzimáticas observamos que as atividades enzimáticas relacionadas com a EROs podem estar envolvidas no processo de infecção do nematoide em estudo. O tecido radicular da cv ‘Paluma’ apresentou menor atividade de ascorbato peroxidase (APX) em relação ao araçazeiro da Costa Rica (P. friedrichstalianium). Diante dos resultados obtidos da parte in silico foi construído um interactoma composto por 78 proteínas que foram apresentadas em grupos. As análises in silico em Arabidopsis thaliana sugerem possíveis vias de resposta envolvidas com planta hospedeira ao estresse biótico, estresse oxidativo, proteínas associadas direta e indiretamente com as duas vias, assim como também as localizações a nível celular dessas proteínas. Os dados e as evidências obtidas neste trabalho serão norteadores para futuros estudos, e a compreensão do comportamento dos processos que ocasionam a resistência das espécies de Psidium spp. a infecção pelo nematoide Meloidogyne enterolobii. Além disso, os dados in silico contribuíram em uma melhor compreensão biológica, trazendo informações que poderão auxiliar em estudos com estresse biótico ocasionado em outras dicotiledôneas.
Caracterização in silico e análise de uma sequência homóloga à sec14 em angiospermas
(2019-06-07) Silva, Camila Rayane Pereira da; Scortecci, Katia Castanho; ; ; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; ; Calsa Júnior, Tercilio;
O Brasil é o maior produtor mundial de cana-de-açúcar. Todas as partes dessa cultura são aproveitadas e usadas como matriz energética para produção não somente do açúcar, mas também de biocombustíveis e outros produtos. Os estudos moleculares com cana-de-açúcar se desenvolvem de forma lenta devido a sua complexidade genômica, possuindo elevada ploidia, contudo a descoberta de novos genes que possam atuar em processos chave desse organismo é valiosa para futuras contribuições à indústria sucroalcooleira. Este trabalho teve como objetivo caracterizar uma sequência homóloga a PROTEÍNA DE TRANSFERÊNCIA DE FOSFATIDILINOSITOL/FOSFATIDILCOLINA - SEC14 (PHOSPHATIDYLINOSITOLPHOSPHATIDYLCHOLINE TRANSFER PROTEIN - SEC14) em cana-de-açúcar que foi identificada em estudos anteriores em bibliotecas subtrativas para o processo de florescimento. A caracterização in silico foi feita por análise funcional do gene, construção de redes de interação proteína-proteína, filogenia, dinâmica molecular do modelo tridimensional da proteína e análise de co-expressão. Ademais, foi realizado um ensaio de expressão por RTqPCR em tecidos vegetais para variedades tardia e precoce, bem como, em tecidos vegetais submetidos à estresses hídrico, oxidativo e por inserção de sulfato de cálcio, além da análise de expressão em diferentes tecidos da planta (folha e raiz). Os resultados obtidos por meio das ferramentas de bioinformática mostram a existência do domínio CRAL-TRIO, que está presente em todas as sequências homólogas, essencialmente na mesma posição, revelando alta conservação da sequência SEC14 em plantas. A árvore filogenética sugere que há prováveis duplicações da proteína SEC14 em plantas. O modelo tridimensional apresenta um provável bolso hidrofóbico para ligação de lipídios, descritos em outros modelos de SEC14 consolidados, sugerindo uma conservação estrutural e que foi confirmado pela dinâmica molecular. Ainda foi verificado, por meio da simulação, um domínio ainda desconhecido no modelo proposto por homologia de SEC14. Os dados de expressão revelam que o gene SEC14 se apresentou diferencialmente expresso entre as variedades precoce e tardia. Além disso, foi verificado que a expressão foi maior em raízes quando comparado com o tecido foliar. Também foi observado que não houve diferença significativa de expressão nostecidos foliares de plantas submetidas ao estresse hídrico e oxidativo, provavelmente devido ao estágio juvenil. Uma outra análise de expressão realizada foi com um material de campo tratado com cálcio, onde não observamos diferença na expressão, mostrando que a SEC14 não foi responsiva para as condições analisadas. Por fim, este estudo fornece informações para um melhor entendimento de como o gene/proteína de SEC14 atua em cana-de-açúcar. Revelam novos saberes sobre estrutura tridimensional dessa proteína nessa cultura e traz novas perspectivas para os estudos moleculares com plantas de interesse econômico como a cana-de-açúcar.
Evidence of müller glia conversion into retina ganglion cells using neurogenin2
(2018-11-12) Guimarães, Roberta Pereira de Melo; Landeira, Bruna Soares; Coelho, Diego Marques; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; Silveira, Mariana S.; Linden, Rafael; Reis, Ricardo A. de Melo; Costa, Marcos Romualdo
Degenerative retinopathies are the leading causes of irreversible visual impairment in the elderly, affecting hundreds of millions of patients. Müller glia cells (MGC), the main type of glia found in the vertebrate retina, can resume proliferation in the rodent adult injured retina but contribute weakly to tissue repair when compared to zebrafish retina. However, postnatal and adult mouse MGC can be genetically reprogrammed through the expression of the transcription factor (TF) Achaete-scute homolog 1 (ASCL1) into induced neurons (iNs), displaying key hallmarks of photoreceptors, bipolar and amacrine cells, which may contribute to regenerate the damaged retina. Here, we show that the TF neurogenin 2 (NEUROG2) is also sufficient to lineage-reprogram postnatal mouse MGC into iNs. The efficiency of MGC lineage conversion by NEUROG2 is similar to that observed after expression of ASCL1 and both TFs induce the generation of functionally active iNs. Treatment of MGC cultures with EGF and FGF2 prior to Neurog2 or Ascl1 expression enhances reprogramming efficiencies, what can be at least partially explained by an increase in the frequency of MGCs expressing sex determining region Y (SRY)-box 2 (SOX2). Transduction of either Neurog2 or Ascl1 led to the upregulation of key retina neuronal genes in MGC-derived iNs, but only NEUROG2 induced a consistent increase in the expression of putative retinal ganglion cell (RGC) genes. Moreover, in vivo electroporation of Neurog2 in late progenitors from the neonatal rat retina, which are transcriptionally similar to MGCs, also induced a shift in the generation of retinal cell subtypes, favoring neuronal differentiation at the expense of MGCs and resuming the generation of RGCs. Altogether, our data indicate that NEUROG2 induces lineage conversion of postnatal rodent MGCs into RGC-like iNs in vitro and resumes the generation of this neuronal type from late progenitors of the retina in vivo.
Fauna ameaçada de extinção e unidades de conservação na mata atlântica do norte
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2023-07-03) SILVA, Rafael Leandro Vicente Ferreira da; Almeida, Adriana Monteiro de; http://lattes.cnpq.br/1733681004723492; http://lattes.cnpq.br/6052203821552757; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; http://lattes.cnpq.br/0972767522303368; Carneiro, Luciana Silva; http://lattes.cnpq.br/0236958347394500
A Mata Atlântica brasileira sofre com a perda de área, o que ocasiona um declínio de biodiversidade. Nesse bioma habitam diversas espécies endêmicas, sendo considerado um importante hotspot de biodiversidade. Muitas ameaças cercam essa floresta e afetam as espécies da região, das quais muitas são ameaçadas de extinção. Uma das formas concretas de proteger espécies ameaçadas é através da criação de unidades de conservação (UCs), amplamente aplicadas pelo governo brasileiro como uma estratégia de conservação. No Nordeste, a área compartilhada pelos estados de Alagoas, Pernambuco, Paraíba e Rio Grande do Norte é conhecida como Mata Atlântica do Norte (NAF). O presente estudo analisou os registros de espécies animais ameaçadas em extinção e sua presença ou não nas Unidades de Conservação da Mata Atlântica do Norte. Nesta região, as UCs de uso sustentável são mais abundantes e ocupam maior área se comparadas às UCs de proteção integral dentro das esferas federal e estadual. Observamos que das 33 espécies ameaçadas analisadas, apenas três delas não foram registradas dentro das 103 unidades de conservação da área. Observamos mais registros de espécies criticamente ameaçadas fora de unidades de conservação que o esperado ao acaso (x2 =13,636, p <0,05). Na região estudada ainda existem espécies ameaçadas que não foram observadas em unidades de conservação. A NAF precisa de mais UCs para conseguir proteger toda a sua fauna ameaçada.
Floração em cana-de-açúcar - desvendando o papel da HINT1 e Subtilase
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2021-12-21) Morais, Emanoelly Roberta de Carvalho; Scortecci, Katia Castanho; Medeiros, Nathalia Maíra Cabral de; http://lattes.cnpq.br/1130922293513012; https://orcid.org/0000-0002-4690-2785; http://lattes.cnpq.br/4808910380593455; https://orcid.org/0000-0003-1726-5331; http://lattes.cnpq.br/4263101789342611; Meneses, Carlos Henrique Salvino Gadelha; Golbert, Daiane Cristina Ferreira
O processo de floração é uma etapa crítica que promove a transição do ápice meristemático vegetativo para ápice meristemático reprodutivo e, consequentemente, o desenvolvimento das estruturas florais e das sementes. Essa transição é orquestrada por diferentes sinais externos e internos que vêm sendo caracterizados em diferentes plantas como os modelos Arabidopsis thaliana, Oryza sativa e Zea mays. Nas plantas de cana-de-açúcar, o processo de floração não é muito conhecido, mas sabe-se que a transição do ápice meristemático vegetativo para reprodutivo tem um forte impacto na produção do suco, açúcar e álcool. Devido a este aspecto, este trabalho está associado com a caracterização de uma sequência que apresenta homologia à proteína HINT e foi identificada anteriormente por meio de bibliotecas subtrativas do grupo de pesquisa. Este trabalho visa a compreensão do papel desta proteína em canade-açúcar e em outras plantas utilizando algumas ferramentas de bioinformática. Verificou-se que estas sequências são conservadas em plantas e se separam em dois grandes ramos: monocotiledôneas e dicotiledôneas. Os dados obtidos com a modelagem mostraram que a ScHINT pode ser uma proteína funcional, pois apresenta os sítios de ligação importantes para sua atividade catalítica. Uma segunda proteína, ScSUBTILASE, foi caracterizada neste trabalho e já havia sido identificada anteriormente num ensaio de proteína-proteína por meio da metodologia de dois-híbridos. Foi verificado que a proteína ScSUBTILASE também é conservada em plantas, e a modelagem mostrou que ela também pode ser funcional pela estrutura obtida e pelos sítios catalíticos identificados. Nos ensaios de dois híbridos foi identificado uma terceira proteína com homologia a PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE. Foi realizado a modelagem e foi observado que essa também deva ser funcional. Os resultados obtidos com os interactomas para as proteínas HINT, SUBTILASE e PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE no modelo Arabidopsis mostraram que estas sequências estão associadas a resposta da produção de EROs. Com base nos resultados apresentados e nos dados da literatura, pode-se propor que ScHINT e ScSUBTILASE podem ter o papel de manter o nível de EROs no ápice meristemático durante o processo de transição. Os resultados obtidos com plantas transgênicas de Nicotiana tabacum contendo cassetes de superexpressão nas orientações senso e anti-senso para ScHINT1 reforçam a proposta que ScHINT esteja associada ao processo de floração.
Identificação e caracterização de componentes da via de excisão de bases (BER) em cana-de-açúcar (SACCHARUM spp.)
(2018-08-15) Medeiros, Nathalia Maíra Cabral de; Scortecci, Katia Castanho; ; ; Versieux, Alice de Moraes Calvente; ; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; ; Sluys, Marie-anne Van; ; Calsa Júnior, Tercilio;
A produtividade de qualquer cultivar está diretamente relacionada com a preservação de seu código genético, pois qualquer alteração na sequência pode acarretar consequências que afetam diretamente o desenvolvimento/crescimento do vegetal. A resposta ao dano ao DNA ocorre por meio de seu reparo que transcorre por intermédio de diferentes vias, sendo uma delas a via de excisão de bases (BER), cujos estudos em plantas ainda são inferiores em comparação a outros organismos eucariotos. Um dos obstáculos no avanço dessas pesquisas é a complexidade do genoma vegetal presente em alguns cultivares de importância agroeconômica, de modo que muitos estudos utilizam organismos modelos diploides. Este trabalho propõe preencher a lacuna existente no conhecimento da via BER em relação a plantas não-modelos e poliploides, tendo como alvo a cana-de-açúcar. A primeira abordagem do trabalho, foi a identificação de componentes da via BER em cana-de-açúcar e comparar os resultados obtidos com as sequências de outros organismos vegetais para o aprofundamento na questão da conservação desta via. A segunda abordagem se utilizou de uma sequência homóloga a AP endonuclease de Arabidosis thaliana (AtARP) em cana-de-açúcar denominada de ScARP1. Esta foi alvo de um ensaio de caracterização enzimática. Para primeira abordagem, considerou-se os resultados de trabalhos anteriores, onde foi verificado uma duplicação em cana-de-açúcar para a sequência AP endonuclease (ScARP1 e ScARP3), além de trabalho recente de revisão da via BER em plantas. Desta forma, foi efetuada uma busca nos bancos de dados de sequências ESTs para cana-de-açúcar (SUCEST-FUN) por sequências pertencentes a via BER. Para verificar a ocorrência de duplicações, os resultados dessa busca foram submetidos a analises filogenéticas e inferências Bayesianas. As sequências encontradas foram caracterizadas quanto a presença de domínios conservados, além de algumas delas foram modeladas, criando modelos 3D hipotéticos. Algumas das presumíveis proteínas identificadas diferiram em sua estrutura com as proteínas de referência de A. thalina. Ademais, múltiplas cópias de sequência foram observadas em certas famílias vegetais em detrimento de outras. Para a segunda abordagem, a proteína ScARP1 foi clonada, expressa e purificada. Com esta foram realizados diferentes ensaios que visaram avaliar a sua eficiência enzimática (considerando temperatura, cofatores enzimáticos e concentração de sais), assim como os substratos que seriam reconhecidos por ScARP1. Observou-se que a proteína ScARP1 possui apenas atividade AP endonuclease. Além disso, observou-se uma complementação parcial de ScARP1 em extratos proteicos do mutante arp- /- de A. thalina. Com esse trabalho foi possível identificar membros da via BER em cana-de-açúcar, além de caracteriza-los estruturalmente e filogeneticamente a qual possibilitou destacar diferenças entre sequências de monocotiledôneas e dicotiledôneas. Ademais, em relação a ScARP1, determinou-se que esta apresenta atividade Ap endonuclease essencial para a sua atuação em BER. Com isso, amplificou-se o conhecimento desta via em cana-de-açúcar, bem como em organismos vegetais de forma geral.
Prospecção do gene da Calmodulina em plantas
(2018-07-25) Barreto, Kellya Francisca Mendonça; Scortecci, Katia Castanho; ; ; Meneses, Carlos Henrique Salvino Gadelha; ; Macedo, Cristiane Elizabeth Costa de; ; Golbert, Daiane Cristina Ferreira; ; Setta, Nathalia de;
A cana-de-açúcar é uma das mais importantes monoculturas produtoras no Brasil como fonte geradora de biocombustível renovável de primeira e segunda geração, assim como de açúcar e outros derivados. As condições de estresse abiótico como o déficit hídrico e alta salinidade do solo para a região Nordeste podem desfavorecer o seu cultivo afetando os vegetais a florescerem precocemente. Este apresenta um impacto negativo na cultura de cana-de-açúcar podendo promover uma redução na produção de álcool e açúcar. Neste sentido estudos moleculares utilizando genes envolvidos na via de florescimento são de extrema importância econômica. Neste estudo, foi avaliado o papel da sequência ScCAM (sequência da Calmodulina encontrada em cana-de-açúcar) identificada anteriormente, pelo nosso grupo, como potencial associado ao processo de florescimento. Assim, foram utilizadas as abordagens de bioinformática, interação proteína-proteína (ensaios de dois híbridos), análise de plantas transgênicas Nicotiana tabacum contendo o cassete de super-expressão em orientação anti-senso bem como análise histológica de material de cana-de-açúcar obtido em campo de produção. Primeiramente, as análises de bioinformática realizadas por meio de comparação da sequência nucleotídica apresentou 99% de identidade entre a sequência ScCAM com as sequências de AtCAM (Arabidospis thaliana), o qual, utilizando as sequências codantes (CDS) foi construída uma árvore filogenética que permitiu observar a alta conservação da calmodulina em plantas. Com base nestes resultados foi realizada, então, a modelagem em 3D da sequência ScCAM, e esta foi sobreposta ao modelo 3D da AtCAM referente ao cristal 4AQR, possibilitando a observação dos motivos EF-hands e toda a estrutura proteica. Este modelo permitiu propor uma possível funcionalidade para a sequência ScCAM. Em seguida, foi construída uma rede de interação de proteínas utilizando a sequência de AtCAM7 (homóloga a ScCAM em Arabidopsis thaliana) gerada por via do programa Cytoscape. Por meio do programa Gene Ontology (GO), os Clusters da rede foram enriquecidos, revelando algumas proteínas que possivelmente estejam atuando como indutoras da floração, bem como, no controle da homeostase durante o processo de oxidação/redução. Esses dados também sugerem que a AtCAM7 possa estar envolvida na sinalização em resposta ao estresse. Por meio da metodologia de dois híbridos utilizando leveduras foram obtidos dois clones que tiveram uma identidade de 77,6% para as proteínas ribossomais L31-1 e L19-1 de A. thaliana (acesso Uniprot: Q9SLL7). Estes resultados sugerem que a proteína ScCAM possa interagir com as proteínas ribossomais. Na abordagem utilizando plantas transgênicas de Nicotiana tabacum contendo o cassete de superexpressão em anti-senso foram observadas um aumento no potencial germinativo destas sementes; o aumento no número dos ramos da inflorescência e frutos, além das alterações estruturais nos tecidos das raízes com grande aumento dos pelos radiculares quando comparado com as linhagens denominadas de controle e as plantas não transformadas (selvagens). Nos tecidos foliares não foram observadas alterações morformétricas. No entanto, houve alteração na altura, inflorescência e frutos das plantas. Paralelamente, foi realizada uma análise histológica para o tecido meristemático apical de plantas de cana-de-açúcar coletadas em campo de produção para as variedades de florescimento precoce e tardio. As análises histológicas permitiram observar que na variedade precoce houve indução floral entre 30-60 dias de antecedência quando comparada a variedade tardia, semelhante com as características das plantas transgênicas cultivadas em ambiente controlado. Os resultados obtidos por meio das análises de bioinformática, plantas transgênicas de N. tabacum in vivo, permitem propor que a sequência CAM em plantas possa estar associada ao florescimento. As proteínas identificadas na rede de interações indicaram que a AtCAM pode atuar em vias de sinalização de estresse por meio de alteração de processos fisiológicos, na remodelação dos tecidos meristemáticos e raízes, por interações entre Ca+2 + CAM e actinas modulando o tempo de crescimento, desenvolvimento e florescimento. Os resultados obtidos das plantas transgênicas junto com os dados obtidos com o duplo híbrido, sugerem que a ScCAM possa atuar junto a proteína 60S ribossomal como indutora floral através da ativação ou inibição de genes pertencentes a via de floração. Bem como, possíveis potencializadores quanto ao aumento da biomassa.
Reprogramação de astrócitos corticais em neurônios utilizando coquetel de pequenas moléculas
(Universidade Federal do Rio Grande do Norte, 2016-11-02) Farias, Ana Raquel Melo de; Costa, Marcos Romualdo; Velho, Tarciso André Ferreira; Golbert, Daiane Cristina Ferreira
Recentemente, diversas técnicas têm sido descritas visando à geração de neurônios que podem ser usados em terapias celulares objetivando o tratamento de doenças neurodegenerativas ou lesões agudas no sistema nervoso central. Uma dessas técnicas inclui a reprogramação de células já diferenciadas em neurônios, de forma direta ou indireta. Entretanto, a maioria dos protocolos de reprogramação celular depende da expressão de genes ectópicos, o que pode ocasionar outras alterações transitórias não esperadas nas células reprogramadas. A fim de contornar esses efeitos colaterais, investigou-se neste trabalho a possibilidade de reprogramação de astrócitos corticais de camundongos pós-natais em neurônios, através da exposição transitória das células a um coquetel de pequenas moléculas adicionado ao meio de cultivo celular. O referido coquetel inclui moléculas que atuam em diferentes vias celulares, dentre as quais a regulação da expressão gênica, modulação da neurogênese e controle do ciclo celular, tendo sido previamente utilizado na reprogramação de fibroblastos em neurônios. Para demonstrar o fenótipo neuronal após o tratamento dos astrócitos cultivados na presença das pequenas moléculas, foi avaliada a expressão de proteínas tipicamente neuronais, a morfologia celular e a expressão gênica, através dos métodos de imunocitoquímica e RT-qPCR. A partir dos dados preliminares observou-se que os astrócitos tratados adquirem morfologia e expressão gênica compatíveis com um fenótipo neuronal, indicando que o coquetel de pequenas moléculas pode ser utilizado na reprogramação de astrócitos em neurônios induzidos.

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